Uzročnik tuberkuloze i njegova svojstva. Mycobacterium tuberculosis

1. Morfologija i kulturna svojstva

Ćelijski zid je okružen slojem glikopeptida koji se nazivaju mikozidi (mikrokapsule).

Bacil tuberkuloze teško se percipira konvencionalnim bojama (za bojenje je potrebno 24-30 sati prema Gramu). Gram pozitivna.

Bacil tuberkuloze ima strukturne karakteristike i hemijski sastav ćelijskog zida, koji se ogledaju u svim biološkim svojstvima. Glavna karakteristika je da ćelijski zid sadrži veliku količinu lipida (do 60%). Većina njih su mikolne kiseline, koje su uključene u okvir ćelijskog zida, gdje se nalaze u obliku slobodnih glikopeptida koji su dio faktora pupčane vrpce. Faktori pupčane vrpce određuju obrazac rasta u obliku vrpce.

Ćelijski zid sadrži lipoarabinomanan. Njegovi terminalni fragmenti, kapa, određuju sposobnost patogena da se specifično veže za receptore makrofaga.

Mycobacterium tuberculosis se boji Ziehl-Neelsen metodom. Ova metoda se zasniva na otpornosti mikobakterija na kiselinu, koja je određena karakteristikama hemijskog sastava ćelijskog zida.

Po vrsti proizvodnje energije aerobni. Prema temperaturnim zahtjevima - mezofili.

Njihova reprodukcija se odvija vrlo sporo, vrijeme generiranja je 14-16 sati.To je zbog izražene hidrofobnosti, što je posljedica visokog sadržaja lipida. To otežava nutrijentima da uđu u ćeliju, što smanjuje metaboličku aktivnost ćelije. Vidljiv rast na podlozi je 21-28 dana.

U sve ove podloge potrebno je dodati supstance koje inhibiraju rast kontaminirajuće flore.

Na gustim hranjivim podlogama formiraju se karakteristične kolonije: naborane, suhe, s neravnim rubovima i ne spajaju se jedna s drugom.

U tečnim medijima rastu u obliku filma. Film je u početku nježan i suh, ali s vremenom se zgusne i postaje kvrgav i naboran sa žućkastom nijansom. Okruženje je neprozirno.

Bakterije tuberkuloze imaju određenu biohemijsku aktivnost, a njeno proučavanje se koristi za razlikovanje uzročnika tuberkuloze od ostalih predstavnika grupe.

1) mikolne kiseline;

Uzročnik tuberkuloze ulazi u tijelo u finim aerosolima. Uzročnik mora ući u alveole, gdje ih apsorbiraju rezidentni makrofagi, odnos s kojima određuje daljnji razvoj infekcije. Tuberkuloza je klasična infekcija intramakrofaga.

Unutar makrofaga, bakterije tuberkuloze su otporne na baktericidne faktore fagocita zbog snažne lipidne membrane.

Granulom se razvija odmah nakon infekcije, ali kasnije dobija snažan poticaj za razvoj kada se u tijelu pojave T-limfociti osjetljivi na patogen.

Nakon 2-3 sedmice preimuni granulom, pod uticajem T-limfocita, prelazi u specifičan (postimuni) granulom, koji se naziva tuberkulom.

Daljnji događaji povezani su sa specifičnom upalom, koja se temelji na alergijskoj reakciji na bakterijske antigene.

Tuberkuloza pluća je najčešća, ali mogu biti zahvaćena i crijeva, mišićno-koštani sistem, genitourinarni sistem itd.

Postoje dvije patogenetske varijante tuberkuloze.

Razvija se bez alergije na patogen. U zoni invazije, patogen se hvata makrofaga i razvija se nespecifična granulomatozna reakcija. Bakterije lako prolaze ovu barijeru i brzo prodiru u regionalne limfne čvorove, krv i razne organe.

Nakon 2-3 sedmice formira se primarni kompleks tuberkuloze, koji uključuje:

1) primarni afekt - žarište u plućnom tkivu;

2) limfadenitis – zapaljenje regionalnih limfnih čvorova;

3) limfangitis - upala limfnih sudova.

Najčešće se sama zacjeljuje, podvrgava se fibrozi i kalcifikaciji (Ghohnova lezija). U ovom fokusu bakterije perzistiraju, ali se ne oslobađaju u vanjsko okruženje.

U drugim slučajevima razvija se akutna tuberkuloza.

Moguća je i reinfekcija spolja.

Nastanku sekundarne tuberkuloze doprinose nepovoljni životni uslovi, hronične bolesti, alkoholizam, stres itd.

Karakteristike imuniteta kod tuberkuloze:

1) nesterilni, podržani onim bakterijama koje perzistiraju u organizmu;

2) nestabilan, odnosno ne štiti od reaktivacije endogene infekcije i reinfekcije spolja;

3) se stvaraju antitela, ali nemaju zaštitnu vrednost;

4) glavni mehanizam imuniteta je ćelijski; Infektivne alergije su od primarnog značaja.

3. Dijagnostika. Prevencija. Tretman

1) mikroskopski pregled. Od sputuma se prave dva razmaza. Jedan je obojen Ziehl-Neelsenom, drugi je tretiran fluorohromom i pregledan direktnom fluorescentnom mikroskopom. Je pouzdana metoda;

2) bakteriološko istraživanje. Potrebno je. Nedostatak: mikobakterije sporo rastu na hranljivim podlogama (4 nedelje). Tokom studije utvrđuje se osjetljivost na tuberkulostatičke lijekove.

Koriste se ubrzane metode za otkrivanje mikobakterija u usjevima, na primjer, metodom Price. Mikrokolonije omogućavaju da se vidi prisustvo faktora vrpce kada bakterije koje ga formiraju formiraju pletenice, lance i niti;

3) polimerna lančana reakcija (PCR). Koristi se za ekstrapulmonalne oblike;

4) serodijagnostika - ELISA, RPGA, fluorescentna reakcija. Nije vodeća metoda;

5) Mantoux test sa tuberkulinom - alergološka metoda. Tuberkulin je lijek napravljen od ubijene kulture mikobakterija. Test se izvodi prilikom odabira osoba za revakcinaciju radi procjene toka procesa tuberkuloze;

6) mikrokultivacija na čašama u podlozi Školjnikova;

7) biološka metoda. Rijetko se koristi kada je patogen teško izolirati iz materijala koji se testira. Laboratorijske životinje (zamorci, zečevi) su zaražene materijalom od pacijenta. Promatranje se provodi do smrti životinje, a zatim se ispituje punkcija njenih limfnih čvorova.

Specifična prevencija: živa BCG vakcina. Vakcinacija se vrši u porodilištu 4-7 dana života intradermalnom metodom.

Revakcinacija se provodi za osobe sa negativnim tuberkulinskim testom u intervalima od 5-7 godina do 30. godine života. Na taj način se stvara infektivni imunitet pri čemu se javlja reakcija preosjetljivosti odgođenog tipa.

Većina antibiotika nema efekta na Mycobacterium tuberculosis, pa se koriste tuberkulostatici.

Koriste se dvije serije lijekova:

1) lijekovi prve linije: izoniazid, pirazinamid, streptomicin, rifampicin, etambutol, ftivazid;

2) lijekovi druge linije (ako su lijekovi prve linije neefikasni): amikacin, kanomicin, natrijum aminosalicilat (PAS), dapson, cikloserin itd.

Karakteristike terapije za tuberkulozu:

1) liječenje treba započeti što je prije moguće, odmah nakon otkrivanja bolesti;

2) terapija je uvek kombinovana - koriste se najmanje dva leka;

3) provodi se dugo (4-6 mjeseci), što je povezano sa dugim životnim ciklusom mikobakterija;

4) mora biti kontinuirana, jer prekidi dovode do stvaranja rezistencije patogena i hroničnosti procesa.

40. Tuberkuloza

Patogen pripada rodu Mycobacterium, pogled M. tubercules.

To su tanke šipke, blago zakrivljene i ne formiraju spore ili kapsule.

Kao rezultat liječenja lijekovima protiv tuberkuloze, patogen može izgubiti otpornost na kiselinu.

Mycobacterium tuberculosis karakterizira izražen polimorfizam. U njihovoj citoplazmatskoj membrani nalaze se karakteristične inkluzije - zrna Mukha. Mikobakterije u ljudskom tijelu mogu se transformirati u L-oblike.

Mikobakterije su zahtjevne za hranljive podloge. Faktori rasta – glicerol, aminokiseline. Rastu na krompir-glicerin, jaja-glicerin i sintetička podloga.

Patogeneza

Kao rezultat interakcije mikobakterija i makrofaga pod utjecajem faktora virulencije, razvija se upala granulomatoznog tipa.

Iz pluća bacil tuberkuloze ulazi u regionalne limfne čvorove, a zatim u krvotok.

Put zaraze je vazdušnim putem. Izvor je bolesna osoba koja u akutnom periodu sa sputumom luči bacile tuberkuloze.

1. Primarna tuberkuloza. Javlja se kod osoba koje ranije nisu imale kontakt sa patogenom. Infekcija se javlja u djetinjstvu ili adolescenciji.

2. Sekundarna tuberkuloza. Pojavljuje se hronično. Pojavljuje se kada se primarna lezija reaktivira (nakon 5 godina ili više).

Patogene mikobakterije - F. K. Cherkes

Poglavlje 33. Patogeni tuberkuloze

Predstavnici porodice mikobakterija Mycobacteriaceae imaju izgled tankih, ponekad razgranatih štapića, koji podsjećaju na gljivu. Spori rast na hranljivim podlogama ih takođe približava gljivama. Ove karakteristike objašnjavaju naziv porodice, roda - Mycobacterium.

Mikobakterije su otporne na kiseline, alkalije i alkohol, što je posljedica prisustva masnih voštanih tvari u membranama njihovih stanica.

Rod mikobakterija uključuje patogene i nepatogene predstavnike. Uzročnici tuberkuloze i uzročnici lepre su patogeni za ljude.

Tuberkuloza je široko rasprostranjena među životinjama, pticama i glodavcima.

Postoji nekoliko vrsta bacila tuberkuloze:

1. Ljudski - Mycobacterium tuberculosis

2. Goveda - Mycobacterium bovis

3. Ptičji - Mycobacterium avium

4. Miš - Mycobacterium murium

5. Postoje mikobakterije koje izazivaju bolesti kod hladnokrvnih životinja. To uključuje posebnu grupu atipičnih mikobakterija.

Trenutno su atipične mikobakterije od posebne važnosti. Dijele se prema nizu karakteristika u 4 grupe: I, II, III, IV (prema Runyonu). Razlikuju se od Mycobacterium tuberculosis po tome što su manje zahtjevni za hranljive podloge. Razlikuju se jedni od drugih u odnosu na hranljive podloge, brzinu rasta, sposobnost stvaranja pigmenta, kao i aktivnost katalaze i peroksidaze. Predstavnici grupe I i III izazivaju bolesti kod ljudi.

Morfologija. Uzročnike tuberkuloze otkrio je R. Koch 1882. To su tanke šipke dimenzija 1,5-4 × 0,3-0,5 mikrona. Vrlo su polimorfni: ravni, zakrivljeni, u obliku pljoske. Kao rezultat varijabilnosti bakterija, postoje oblici koji daju kiselinu i vrlo mali, takozvana zrna Mukha. Raznolikost oblika često ovisi o sastavu okoliša, djelovanju antibiotika i kemoterapeutskih sredstava na njih. Bakterije tuberkuloze su nepokretne i nemaju spore ili kapsule. Gram-pozitivne su, ali ne prihvataju dobro anilinske boje. Dobro su obojene crvenom bojom Ziehl-Neelsen metodom (vidi sliku 4), koja koristi koncentrirane boje i jetkanje.

Uzgoj. Uzročnici tuberkuloze su aerobi. Rastu na temperaturi od 37-38°C i pH od 5,8-7,0. Karakteristična kulturološka obilježja bacila tuberkuloze su spor rast i zahtjevnost hranljivih podloga. Rastu prvenstveno samo na posebnim medijima: Petragnani, Petrov, Levenshtein-Jensen media. Mogu se uzgajati na glicerinskom bujonu, glicerinskom agaru, glicerinskom krompiru. Glicerin stimuliše rast mikobakterija. M. bovis ne zahtijeva glicerol. Najrasprostranjenija podloga je Lowenstein-Jensen podloga, koju preporučuje SZO kao standardnu podlogu za uzgoj bacila tuberkuloze. Trenutno koriste i medij Finn II, koji se razlikuje od Lowenstein-Jensen medija po tome što koristi mononatrijum glutamin umjesto asparagina. Na ovoj podlozi mikobakterija tuberkuloze raste nešto brže nego na podlozi Lowenstein-Jensen, a procenat izolovanih kultura je veći. Bacili tuberkuloze mogu se uzgajati i na sintetičkim podlogama, kao što je Sotonova podloga.

Mycobacterium tuberculosis se javlja u R- i S-oblici. R-oblik je virulentniji (M. bovis se češće nalazi u R-oblici). Na čvrstim hranljivim podlogama, patogeni tuberkuloze formiraju suve, naborane, krem boje kolonije sa blago podignutim središtem i nazubljenim ivicama (vidi sliku 26). U tekućim hranjivim podlogama Mycobacterium tuberculosis raste 10-15 dana u obliku filma, koji se postepeno zgušnjava, postaje hrapav, naboran, lomljiv i, zbog gravitacije, ponekad pada na dno. Bujon ispod filma ostaje proziran.

Enzimska svojstva. Uzročnici tuberkuloze su biohemijski malo aktivni. Imaju proteolitički enzim, koji pod određenim uslovima (kisela i alkalna sredina) razgrađuje proteine. Oni također razgrađuju neke ugljikohidrate i stvaraju ureazu. Ali ova svojstva nisu konstantna. Stoga proučavanje enzima nema dijagnostičku vrijednost.

Formiranje toksina. Uzročnici tuberkuloze proizvode endotoksin, koji je prvi izolovao R. Koch (1890) i nazvao ga tuberkulin. „Stari“ tuberkulin je kulturna tečnost dobijena uzgojem kulture u glicerinskom bujonu i isparena na 70°C do 1/10 prvobitne zapremine. “Novi” tuberkulin je pročišćeni proteinski derivat tuberkulina.

Tuberkulin ima alergena svojstva. Nema toksičan učinak na zdravo tijelo. Njegovo dejstvo se manifestuje samo u zaraženom organizmu. Stoga se uvođenje tuberkulina koristi u dijagnostičke svrhe, u alergijskim testovima (Pirquet ili Mantoux). U tu svrhu se tuberkulin priprema od goveđeg tipa Mycobacterium tuberculosis.

Virulentni sojevi uzročnika tuberkuloze sadrže poseban faktor lipidne vrpce, koji potiče lijepljenje mikobakterija i njihov rast u obliku pletenica i niti.

Antigenska struktura. Mycobacterium tuberculosis sadrži antigen, koji uključuje proteinske, lipoidne i polisaharidne faktore. Ovaj antigen uzrokuje da tijelo proizvodi antitijela (aglutinine, precipitine, supstance koje vežu komplement, itd.). Međutim, ova antitijela se nalaze u niskim koncentracijama i stoga su od male koristi u dijagnostičke svrhe.

Otpornost na faktore okoline. Mycobacterium tuberculosis je najotporniji od oblika bakterija koje ne nose spore (otpornost je određena prisustvom lipida u njihovoj ljusci). Podnose temperaturu od 100°C 5 minuta. UV zraci uzrokuju njihovu smrt tek nakon nekoliko sati.

U osušenom sputumu žive i do 10 mjeseci. Na niskim temperaturama Mycobacterium tuberculosis perzistira dugo vremena.

Dezinfekcioni rastvori: sublimat (1:1000), karbonska kiselina (5%) uništavaju ih tek nakon jednog dana. Najosjetljiviji su na hloramin i izbjeljivač.

Osjetljivost životinja. Ljudi su veoma osetljivi na M. tuberculosis, životinje i ptice su neosetljive. Od pokusnih životinja, zamorci su vrlo osjetljivi na njega, kod kojih se infekcija događa generalizirano i obično završava smrću životinje.

Krupna i mala stoka i domaće životinje su osjetljive na M. bovis (ljudi nisu osjetljivi, ali djeca se mogu zaraziti korištenjem mlijeka bolesnih životinja).

Od pokusnih životinja najosetljiviji su zečevi kod kojih se infekcija javlja generalizovano. M. avium izaziva bolest kod ptica: pilića, golubova, fazana itd. Međutim, neke životinje mogu da se razbole (ljudi se retko zaraze).

Od pokusnih životinja osjetljivi su zečevi. Njihova infekcija je akutna.

Vrsta miša je patogena uglavnom za voluharice. Kod kunića i zamoraca bolest je kronična.

Izvori infekcije. Čovjek. Manje često životinje.

Putevi prijenosa. Najčešći putevi prijenosa su kapljice u zraku i prašina iz zraka; rjeđe hranu. Moguća je intrauterina infekcija kroz placentu.

Ljudske bolesti i patogeneza. Bolest tuberkuloze karakteriziraju različiti klinički oblici. Postoje plućni (najčešći) i vanplućni oblici: tuberkuloza želuca i crijeva, bubrega, moždanih ovojnica, kostiju i drugih organa.

Svaki od ovih oblika može rezultirati generalizacijom procesa. U slučaju infekcije kapljicama u zraku i prašinom u zraku, primarni fokus se javlja u plućima. U zahvaćenom organu nastaje tuberkul. Tuberkul je skup leukocita i divovskih ćelija, unutar kojih se nalazi Mycobacterium tuberculosis. Uz dobru otpornost tijela, vezivno tkivo okružuje tuberkul, ono se kalcificira i bakterije, ostajući održive, ne protežu se dalje od tuberkula. Ovo je "Ghon fokus" - kalcificirani mali fokus na mjestu primarnog unošenja bacila tuberkuloze (zatvoreni proces).

Kod zatvorenog procesa bacili tuberkuloze se ne izlučuju u sputum, urin itd.

Dakle, čak i uz benigni tok procesa, tijelo se ne oslobađa od patogena tuberkuloze. Smatra se da je 80% ljudi zaraženo bakterijom tuberkuloze. Međutim, klinički su zdravi. Kada se tijelo nađe u nepovoljnim uvjetima, njegove zaštitne funkcije se smanjuju, tuberkulum podliježe nekrozi, oslobađaju se bakterije i uključuju nova područja u proces, dolazi do egzacerbacije, formiraju se šupljine - otvoreni proces. Ponekad može doći do generalizacije procesa, što dovodi organizam do smrti. Tuberkuloza se češće javlja u kroničnom obliku (zatvoreni proces). Radni i životni uslovi su od velike važnosti tokom pogoršanja.

Imunitet. Osoba ima određenu rezistenciju, odnosno kada je zaražena, bolest ne nastaje uvijek, već se formira infektivni (nesterilni) imunitet, koji je određen kompleksom zaštitnih faktora: humoralnih, ćelijskih, kao i otpornosti. organa i tkiva.

Prevencija. Rana dijagnoza, izolacija itd. Za specifičnu prevenciju koristi se živa BCG vakcina (BCG), koju su dobili francuski naučnici Calmette i Guerin. Ova vakcina se daje novorođenčadi jednokratno, intradermalno u vanjsku površinu ramena. Revakcinacija se vrši nakon 7-12 godina, a zatim svakih 5-6 godina do 30. godine života.

Tretman. Antibakterijski lijekovi: streptomicin, rifampicin, PAS, ftivazid itd.

Kontrolna pitanja

1. Ko je i kada otkriven uzročnik tuberkuloze?

2. Na koje vrste se dijele bacili tuberkuloze? Koja vrsta je patogena za ljude?

3. Šta određuje otpornost Mycobacterium tuberculosis?

4. Koja metoda se koristi za bojenje razmaza za otkrivanje tuberkuloznih mikobakterija?

5. Na koje se forme Mycobacterium tuberculosis disocira i koji oblik je patogen?

Mikrobiološki pregled

Svrha studije: identifikacija patogena.

1. Sputum (tuberkuloza pluća i bronhija).

2. Eksudat iz pleuralne šupljine (tuberkuloza pluća, pleura).

3. Ascitična tečnost i feces (crevni oblik tuberkuloze).

4. Urin (tuberkuloza bubrega).

5. Cerebrospinalna tečnost (tuberkulozni meningitis).

6. Krv (generalizacija procesa).

Metode prikupljanja materijala

Bilješka. Tegle za sakupljanje materijala moraju imati poklopce na navoj. Posude za sakupljanje materijala steriliziraju se u autoklavu na 120°C 20 minuta ili kuhanjem 1 sat.

Napredak studije

1. Na kojim hranljivim podlogama se uzgajaju Mycobacterium tuberculosis i koliko traje njihov rast?

2. Kako i zašto se tretira sputum prije inokulacije na hranljive podloge?

3. Opišite rast bacila tuberkuloze na čvrstim i tečnim hranljivim podlogama.

4. Koja životinja je najosjetljivija na ljudski tip bacila tuberkuloze?

Lowenstein-Jensen medijum: fiziološki rastvor; jednobazni kalijum fosfat - 2,4 g; magnezijum sulfat - 0,24 g; magnezijum citrat 10,6 g; asparagin - 3,6 g; glicerin - 12 ml; krompirovo brašno - 5 g; destilovana voda - 600 ml.

Reagensi se rastvore navedenim redosledom uz lagano zagrevanje i sterilišu 2 sata uz tekuću paru. Slana baza se može pripremiti uz zalihe od 3-4 sedmice.

Jajna masa. 24-27 (zavisno od veličine) svježih dijetalnih jaja isperu se toplom tekućom vodom, četkom sa sapunom, urone 30 minuta u 70% alkohol, zatim se preko alkoholne lampe u kutiji sterilnom pincetom razbiju u tikvicu sa perlama , dobro promešati i dodati u 1 litar jajeta u masu dodati 600 ml fiziološkog rastvora. Smjesa se filtrira kroz filter od gaze, doda se 20 ml sterilnog 2% rastvora malahit zelene boje i sipa u epruvete od 5 ml. Koagulacija se vrši na 85°C u trajanju od 45 minuta.

Finska srijeda II. Baza soli: magnezijum sulfat - 0,5 g; natrijum citrat - 1 g; feroamonijum stipsa - 0,05 g; monosupstituisani kalijum fosfat - 20 g; monosupstituisani amonijum citrat - 20 g; mononatrijum glutamat - 5 g; glicerin - 20 ml; destilovana voda - do 1 litra.

Sastojci se rastvore navedenim redosledom u toploj destilovanoj vodi. Postavite pH na 6,3-6,5. Sterilizirajte na 1 atm 20 minuta.

Egg Wednesday. 12 jaja se opere četkom i sapunom, tretira alkoholom. Sterilnom pincetom razbijte i sipajte u sterilnu tikvicu sa perlicama, koja se nakon dodavanja svakog jajeta mućka dok se ne formira homogena masa. Dodati 10 ml 20% vodenog rastvora malahit zelene boje i 300 ml fiziološkog rastvora. Procediti kroz filter od gaze i rolati na temperaturi od 85°C 30 minuta.

Sotonov sintetički medij. U 200 ml destilovane vode dodati 4 g asparagina, 0,5 g gvožđe citrata, 2 g limunske kiseline, 0,5 g magnezijum sulfata, 0,5 g bazičnog kalijum fosfata, 60 g glicerina, 800 ml destilovane vode.

Mikrobiologija Mycobacterium tuberculosis

U rodu Mycobacterium Porodica Mycobacteriaceae iz odjela Firmicutes uključuje nepokretne aerobne gram-pozitivne štapićaste bakterije. Ponekad formiraju strukture nalik na niti nalik miceliju gljiva. To je bila osnova za njihovo ime [grč. mykes, gljiva i lat. bakterija, bakterija].

Zbog toga mikobakterija anilinske boje i konvencionalne metode bojenja ne prihvataju dobro. Za bojenje se koriste intenzivne metode, obično Ziehl-Neelsen. Raste sporo ili vrlo sporo; saprofitske vrste rastu nešto brže. Neke vrste proizvode karotenoidne pigmente koji ne difundiraju u mediju.

Mycobacteria su rasprostranjene u okolini i uzrokuju lezije poznate kao mikobakterioza.Bolesti se bilježe kod raznih hladnokrvnih i toplokrvnih životinja; Najčešće lezije su koža, pluća i limfni čvorovi.

Klasifikacija mikobakterija

Prilikom klasifikacije mikobakterija uzeti u obzir patogenost za ljude, sposobnost stvaranja pigmenta, brzinu rasta i sposobnost sinteze nikotinske kiseline (niacina).

Prema patogenosti dijele se na stvarno patogene (uzrokujući specifične bolesti), potencijalno patogene i saprofitne. mikobakterija. M. tuberculosis, M. leprae, M. bovis imaju patogena svojstva za ljude. Druge vrste koje uzrokuju lezije kod ljudi poznate su kao atipične mikobakterije.

Prema brzini rasta razlikuju se brzorastuće (daju vidljiv rast 4-7 dana), sporo rastuće (rast se opaža nakon 7-10 i više dana) i nerastuće na umjetnim podlogama (M. leprae). vrsta mikobakterija.

Na osnovu sposobnosti stvaranja pigmenata dijele se na fotohromogene (formiraju pigment na svjetlu), skotokromogene (formiraju pigment u mraku) i nefotokromogene (ne stvaraju pigment) vrsta mikobakterija.

Mikrobiologija Mycobacterium tuberculosis

Mikrobiološka dijagnostika 1. Osnovna metoda je bakteriološki pregled

txt fb2 ePub html

Varalice za vaš telefon su nezaobilazna stvar prilikom polaganja ispita, priprema za testove itd. Zahvaljujući našoj usluzi, dobijate priliku da preuzmete varalice o mikrobiologiji i biotehnologiji na svoj telefon. Sve cheat sheets predstavljene su u popularnim formatima fb2, txt, ePub, html, a postoji i java verzija cheat sheeta u obliku zgodne aplikacije za mobilni telefon, koja se može preuzeti uz nominalnu naknadu. Samo preuzmite varalice o mikrobiologiji i biotehnologiji - i nećete se bojati nijednog ispita!

Niste našli ono što ste tražili?

Ako vam je potreban individualni odabir ili rad po narudžbi, koristite ovaj obrazac.

Dijagnostika: 1) mikroskopski pregled. Od sputuma se prave dva razmaza. Jedan

Tuberkuloza

Uzročnik pripada rodu Mycobakterium, vrste M. tuberculesis.

To su tanke šipke, blago zakrivljene i ne formiraju spore ili kapsule.

Bacil tuberkuloze ima karakteristike - ćelijski zid sadrži veliku količinu lipida (do 60%). Većina njih su mikolne kiseline, koje su uključene u okvir ćelijskog zida, gdje se nalaze u obliku slobodnih glikopeptida koji su dio faktora pupčane vrpce. Faktori pupčane vrpce određuju obrazac rasta u obliku vrpce.

Mycobacterium tuberculosis se boji Ziehl-Neelsen metodom. Ova metoda se temelji na otpornosti mikobakterija na kiselinu.

Kao rezultat liječenja lijekovima protiv tuberkuloze, patogen može izgubiti otpornost na kiselinu.

Mikobakterije su zahtjevne za hranljive podloge. Faktori rasta – glicerol, aminokiseline. Rastu na krompir-glicerin, jaja-glicerin i sintetička podloga.

Na gustim hranjivim podlogama formiraju se karakteristične kolonije: naborane, suhe, s neravnim rubovima.

Uzročnik tuberkuloze ulazi u tijelo u finim aerosolima. Patogen mora ući u alveole, gdje ih rezidentni makrofagi apsorbuju.

Kao rezultat interakcije mikobakterija i makrofaga pod utjecajem faktora virulencije, razvija se upala granulomatoznog tipa.

Iz pluća bacil tuberkuloze ulazi u regionalne limfne čvorove, a zatim u krvotok.

Put zaraze je vazdušnim putem. Izvor je bolesna osoba koja u akutnom periodu sa sputumom luči bacile tuberkuloze.

Tuberkuloza pluća je najčešća, ali mogu biti zahvaćena crijeva, mišićno-koštani sistem, genitourinarni sistem itd. Postoje dvije patogenetske varijante tuberkuloze.

1. Primarna tuberkuloza. Javlja se kod osoba koje ranije nisu imale kontakt sa patogenom. Infekcija se javlja u djetinjstvu ili adolescenciji.

Nakon 2-3 sedmice formira se primarni tuberkulozni kompleks (primarni afekt, limfadenitis, limfangitis).

Najčešće se sama zacjeljuje, podvrgava se fibrozi i kalcifikaciji (Ghohnova lezija). U drugim slučajevima razvija se akutna tuberkuloza.

2. Sekundarna tuberkuloza. Pojavljuje se hronično. Pojavljuje se kada se primarna lezija reaktivira (nakon 5 godina ili više).

Nastanku sekundarne tuberkuloze doprinose nepovoljni životni uslovi, hronične bolesti, alkoholizam itd.

Faktori patogenosti.

Faktor lipidnog kabla– glikolipid, je faktor adhezije, uništava mitohondrije ćelija zaraženog organizma,

remeti njihovu respiratornu funkciju i inhibira migraciju polimorfonuklearnih leukocita. Kada se uzgaja, uzrokuje vi-

valjani pojedinci u obliku pletenica, pramenova. Tuberkulin(tuberkuloproteini) ima alergeno dejstvo i izaziva razvoj PCZT.

Glikolipidi vanjski sloj ćelijskog zida ( mikozidi) I receptori za manozu mikobakterije doprinose nedovršenosti

fagocitoza. Tuberculostearic, ftionski, mikolne i druge masne kiseline imaju toksični učinak na tkivo.

Siderofori mikobakterije se natječu s fagocitima za željezo; sintetiziraju enzime koji sadrže željezo i koloniziraju alveo-

polarnih makrofaga.

Karakteristike bolesti

Izvor zaraze su bolesni ljudi i bolesne životinje (goveda) koje luče mikobakterije.Putevi prenosa su najčešće vazdušno-kapni, rjeđe kontaktni i prehrambeni (mlijeko krava). Infekcija se podstiče stalnim kontaktom i životom sa bolesnikom od tuberkuloze. Patogeneza tuberkuloze. Udahnute bakterije fagocitiraju alveolarni plućni makrofagi i transportuju do regionalnih limfnih čvorova. Fagocitoza je nepotpuna.Mikozidni glikolipidi pojačavaju toksični efekat faktora pupčane vrpce, oštećujući mitohondrijalne membrane i inhibirajući fagosomalno-lizozomalnu fuziju. Faktor pupčane vrpce inhibira aktivnost polimorfonuklearnih fagocita.Na ulaznim vratima pluća u acinusima razvija se primarni afekt, zapaljuju se limfni sudovi i regionalni limfni čvorovi koji iz njega izlaze i primarni kompleks. U acinusima se pojavljuje granulom u obliku tuberkuloze. To je olakšano nakupljanjem mliječne kiseline, niskim pH i visokom koncentracijom ugljičnog dioksida. U granulomu se nakuplja veliki broj limfoidnih, plazma ćelija i fibroblasta. U središtu granuloma pojavljuju se područja siraste nekroze. Ovdje su locirani patogeni, oko njih su epiteloidne i gigantske ćelije.Kada se formira imunitet, reprodukcija patogena se usporava, a zatim zaustavlja i razvija se PCZT. Izvor upale je nestao

sijeno, podvrgava se kalcifikaciji i fibrozi, nastaju kalcifikacije ( Gonove epidemije). Nema kliničkih manifestacija, nema faga na gama interferon, oslabljena je HLA-zavisna prezentacija antigena, inhibirana je proliferacija T-limfocita, aktivira se sistem komplementa alternativnim putem i razvija se generalizacija infektivnog procesa. Visoka senzibilizacija organizma dovodi do toksično-alergijskih reakcija. Klinički, ovaj period je praćen kašljem, hemoptizom, gubitkom težine, znojenjem, slabom temperaturom.Kod osoba sa imunodeficijencijom, diseminirana (milijarna) tuberkuloza– nastaju granulomi u različitim organima.

Klinički oblici tuberkuloze: - žarište: utiče na pojedine organe (obično pluća, kosti)

sistem);

- generalizovane forme: milijarna tuberkuloza, tuberkulozni meningitis, tuberkuloza genitourinarnog sistema, creva i dr.

Imunitet ima nesterilnu ćelijsku prirodu.T-limfociti su važni, oslobađaju medijatore koji pojačavaju fagocitozu i imunološku memoriju. Antitijela ne inhibiraju patogena. Razvija se infektivna alergija. Postoji visoka prirodna otpornost na patogen tuberkuloze.

Laboratorijska dijagnostika tuberkuloze. Diferencijacija uzročnika tuberkuloze, mikobakterioze i saprofita otpornih na kiseline.

Laboratorijska dijagnostika

Materijali za ispitivanje su sputum, urin, likvor, punktat limfnih čvorova, biopsija tkiva Bakterioskopska metoda. Razmazi su obojeni prema Ziehl-Neelsenu, identificirani su mali crveni štapići. Kada se boje fluorescentnim bojama (auramin, rodamin), mikobakterije daju žuto-bijeli sjaj u fluorescentnom mikroskopu.Kada je količina patogena mala, koriste se metode obogaćivanja. Homogenizacija– materijal se tretira alkalijom, fibrin se otapa i patogen se oslobađa. Razmazi se pripremaju iz sedimenta centrifugiranja. Flotacija– homogenizovani sputum se tretira ksilenom ili benzenom i dobro protrese. Zbog svoje hidrofobnosti, patogen pluta zajedno sa pjenom. Od njega se priprema bris i boji se po Ziehl-Neelsenu Bakteriološka metoda. Materijal se tretira sumpornom kiselinom i inokulira na podlogu za jaja.

Za identifikaciju M. tuberculosis procijeniti svojstva patogena: uzorak rasta - suh, bradavičast, kremast

kolonije (R-forma); trajanje rasta – 12-60 dana; detektovati prisustvo faktora pupčane vrpce (određeno Priceov metod- nanosi se na staklo

materijal koji se proučava tretira se sumpornom kiselinom kako bi se uništila flora osjetljiva na kiselinu i preparati se uranjaju u citosol

vojnička krv, nakon 3-4 dana preparati se skidaju, boje se po Ziehl-Neelsenu, mikroskopija pokazuje "pletenice" štapića, ako

zbog faktora pupčane vrpce, patogen se nalazi amorfno); Mycobacterium tuberculosis karakteriše rast samo na temperaturi od 37-

380S; ne rastu na običnim podlogama ili podlogama sa salicilatima; pozitivno niacin test(medij sa hloraminom B postaje žut kada

nakupljanje nikotinske kiseline); imati termolabilna katalasa; reducirati nitrate u nitrite; luče ureazu; da mi-

Zamorci su osetljivi na kobakterije tuberkuloze.Za intraspecifičnu diferencijaciju koristi se fagotipizacija sojeva sa deset mikobakteriofaga.Za otkrivanje hipertenzije koristi se ELISA ili RIF, za gensku dijagnostiku se radi PCR i identifikuju genetski markeri.__ Mycobacterium bovis virulentna u S-formi; kolonije su kremaste i glatke; test na niacin negativan; rast do 40 dana; catalase thermolabile; luče ureazu; ne smanjuju nitrate; raste samo na temperaturi od 37-400C. Mycobacterum africanum– rast 31-40 dana; test na niacin je pozitivan; virulentna u S-formi; katalaza je toplotno labilna; ne smanjuju nitrate; luče ureazu. Ostala svojstva kakua M. tuberculosis.Mycobacterium tuberculosis se mora razlikovati od atipičnih bakterija otpornih na kiseline koje uzrokuju mikobakteriozu.Atipične bakterije otporne na kiselinu imaju narandžasti pigment

ment, virulentan u S-formi, raste na podlozi sa salicilatima, ima termostabilnu katalazu, raste za 10-20 dana na temperaturi od 22-450C, nema faktor kord.Saprofiti otporni na kiseline M.smegmatis, za razliku od prethodnih patogena, rastu na jednostavnim podlogama, trajanje rasta je 3-4 dana, imaju S-oblik, narandžasti pigment, bez znakova patogenosti, osjetljivi su na alkohol.

Biotest se koristi za izbrisane forme. Ispitni materijal se utrlja intradermalno na zamorce. Nakon 10-14 dana pojavljuje se čir koji dugo ne zacjeljuje, a Mantouxova reakcija postaje pozitivna Metoda alergijskog testa je Mantouxova reakcija sa tuberkulinom.Intradermalna injekcija tuberkulin PPD(PPD– prečišćeni proteinski derivat). Ako je organizam inficiran (imuno), onda se nakon 24-48-72 sata uočava infiltracija i hiperemija, tj. PPCT se razvija. Kod pacijenata sa tuberkulozom prečnik papule je 6 mm (ili više) veći nego kod vakcinisanih.Genska dijagnostika - PCR Serološka metoda: koristi se za otkrivanje antitela

Državna budžetska obrazovna ustanova visokog stručnog obrazovanja „Uralski državni medicinski univerzitet” Ministarstva zdravlja Ruske Federacije Odsjek za mikrobiologiju, virusologiju i imunologiju

Smjernice za praktične vježbe za studente

OOP specijalnost 060301.65 Farmaceutska disciplina C2.B.11 Mikrobiologija

1. Tema: Uzročnici tuberkuloze

2. Ciljevi časa: Sa učenicima proučiti svojstva uzročnika tuberkuloze, faktore patogenosti, patogenezu, metode dijagnostike, prevencije i liječenja tuberkuloze.

3. Ciljevi lekcije:

3.1. Proučavanje svojstava uzročnika tuberkuloze.

3.2. Proučavanje patogeneze tuberkuloze.

3.3. Proučavanje metoda dijagnostike, prevencije i liječenja tuberkuloze.

3.4. Samostalan rad.


kompetencije
Sposobnost i	Morfološki	uživajte	Tehnika bojenja
spremnost	znakovi, kulturni	alata	lijekovi prema Tsil-
analiza	ny, biohemija-	prilikom dirigovanja	Nielsen
društveno značajna	hemijska svojstva	mikrobiološki
problemi i procesi,	patogeni	istraživanja
koristiti na	tuberkuloza
metode prakse
humanitarno,
prirodne nauke,
biomedicinski
i kliničke nauke u
razne vrste
profesionalni i
društveni
aktivnosti
Sposobnost i	Principi i	Ponašanje
spremnost za učešće		sanitarni	biološki
u postavljanju naučnih	dijagnostika	obrazovni	konceptualni
zadatke i njihove	prevencija i	rad sa stanovništvom	aparata
eksperimentalni
implementacija	tuberkuloza

4. Trajanje nastave u akademskim satima: 3 sata.

5. Sigurnosna pitanja na temu:

5.1. Morfološka, tinktorijalna, kulturološka i biohemijska svojstva uzročnika tuberkuloze.

5.2. Faktori patogenosti uzročnika tuberkuloze.

5.3. Metode dijagnostike, prevencije i liječenja tuberkuloze.

6. Zadaci i smjernice za njihovu implementaciju.

U toku nastave student mora:

6.1. Odgovorite na pitanja nastavnika.

6.2. Učestvujte u raspravi o pitanjima koja se proučavaju.

6.3. Radite samostalno.

Teoretske informacije Tuberkuloza- hronična zarazna bolest praćena

specifična oštećenja različitih organa i sistema (respiratorni organi, limfni čvorovi, crijeva, kosti, zglobovi, oči, koža, bubrezi, mokraćni putevi, genitalije, centralni nervni sistem). Kod tuberkuloze se u organima formiraju specifični granulomi (granulum - zrno) u obliku čvorića ili tuberkula (tuberculum - tuberkul), nakon čega slijedi njihova zgrušana degeneracija (dezintegracija) i kalcifikacija.

Istorijska referenca. Ova bolest je od davnina bila poznata pod nazivima konzumacija, tuberkuloza, škrofula zbog svojih karakterističnih kliničkih znakova. Laennec je 1819. godine prvi odvojio “konzumaciju” od drugih plućnih bolesti; skovao je pojam “tuberkuloza” (otuda sinonim – tuberkuloza). Godine 1882. R. Koch je otkrio uzročnika tuberkuloze i dobio čistu kulturu na serumskoj podlozi (Kochov bacil ili bacil). Godine 1890. R. Koch je dobio tuberkulin („vodeno-glicerolni ekstrakt kultura tuberkuloze“). Godine 1911. R. Koch je dobio Nobelovu nagradu za otkriće uzročnika tuberkuloze.

Taksonomija. Odeljenje Firmicutes, porodica Mycobacteriaceae, rod Mycobacterium.

Tuberkuloza kod ljudi najčešće izazivaju tri vrste mikobakterija: M. tuberculosis (Kochov bacil, ljudska vrsta - izaziva bolest u 92% slučajeva), M. bovis (goveđa vrsta - izaziva bolest u 5% slučajeva), M. africanum (srednja vrsta - uzrokuje bolest u 3% slučajeva, mnogo češće u Južnoj Africi). Rijetko, tuberkulozu kod ljudi izazivaju M. microti (tip miša) i M. avium (ptičji tip, koji uzrokuje infekciju kod osoba s oslabljenim imunitetom).

Morfološka i tinktorijalna svojstva. Uzročnici tuberkuloze se odlikuju izraženim polimorfizmom (kokoidni, filamentozni, razgranati oblici u obliku bočice). Uglavnom imaju oblik duge tanke ( M. tuberculosis, M. africanum ) ili kratko i debelo ( M. bovis ) štapići sa granularnom citoplazmom koja sadrži od 2 do 12 zrna različitih veličina (metafosfatna zrna - zrna Mukha). Ponekad formiraju strukture nalik na niti koje podsjećaju na micelij gljiva, što je osnova njihovog naziva ( mykes - gljiva i bakterija - bakterije). Popravljeno. Nema spora. Imaju mikrokapsulu.

Gram-pozitivna. Mikobakterije su bakterije otporne na kiseline, alkohol i alkalije. Za njihovo bojenje koristi se metoda Tsil.

Nielsen (termičko jetkanje kiselinama karbonskim fuksinom). S ovom bojom, mikobakterije izgledaju kao jarko crvene šipke, smještene pojedinačno ili u malim skupinama od 2-3 ćelije.

Kulturna dobra. Obavezni aerobi. Rastu sporo zbog prisustva lipida u ćelijskom zidu, koji usporavaju metabolizam sa okolinom. Optimalna temperatura rasta je 37-38ºS. Optimalna pH vrijednost je 6,8-7,2. Mikobakterije su zahtjevne za hranljive podloge, zavisna od glicerola. Za suzbijanje toksičnog djelovanja masnih kiselina koje nastaju tijekom metabolizma, u podlogu se dodaje aktivni ugljen, serum životinjske krvi i albumin, a za suzbijanje rasta prateće mikroflore dodaju se bojila (malahit zelena) i antibiotici koji ne djeluju na mikobakterije. .

Izborni mediji kulture za mikobakterije:

Podloga za jaja Levenshtein-Jensen, Finn-2;

- Middlebrook glicerol medij;

- medij krompira sa žuči;

- polusintetički medij Shkolnikova;

- sintetički mediji Soton, Dubos.

Na čvrstim podlogama, 15-20 dana inkubacije, mikobakterije formiraju hrapave, guste, krem boje, bradavičaste kolonije (podsjećaju na

karfiol).

U tečnim medijima nakon 5-7 dana na površini se formira gust, suv, naboran, krem boje. U isto vrijeme, čorba ostaje prozirna.

Za ekspresnu dijagnostiku koristi se metoda mikrokultivacije na čašama u tečnom mediju ( Metoda mikrokulture cijena), u kojem se nakon 48-72 sata primjećuje rast mikobakterija u obliku isprepletenih djevojačkih „pletenica“ ili „uprtača“ zbog faktora vrpce (engleski cord - podveza, konopac).

Hemijski sastav. Glavne komponente mikobakterija: proteini (tuberkuloproteini), ugljikohidrati i lipidi.

Tuberkuloproteiničine 56% suhe mase materije mikrobnih ćelija. Oni su glavni nosioci antigenskih svojstava mikobakterija, vrlo su toksični i uzrokuju razvoj reakcija preosjetljivosti tipa 4.

Polisaharidi čine 15% suve mase mikobakterijske materije. Ovo su hapteni specifični za rod.

Udio lipida (ftionska kiselina, butirna, palmitinska, tuberkulostearinska i druge masne kiseline, faktor vrpce i vosak D, koji uključuje mikolnu kiselinu) čini 10 do 40% suhe mase mikobakterijske supstance. Visok sadržaj lipida određuje otpornost patogena na kiseline, alkohol i alkalije, virulenciju, poteškoće u bojenju stanica konvencionalnim metodama i stabilnost u okolišu. Lipidi štite bakterijsku stanicu, potiskuju fagocitozu, blokiraju aktivnost staničnih enzima i uzrokuju razvoj granuloma i kazeozne nekroze.

Otpor. U osušenom sputumu pacijenta, ćelije ostaju vitalne i virulentne 5-6 mjeseci. Ostaju na pacijentovim predmetima duže od 3 mjeseca. U zemljištu ostaju do 6 mjeseci, u vodi do 15 mjeseci. Sunčeva svjetlost uzrokuje smrt mikobakterija za 1,5 sat, UFL – za 2-3 minute. Tokom pasterizacije uginu u roku od 30 minuta. Sadrži klor

lijekovi uzrokuju smrt uzročnika tuberkuloze u roku od 3-5 sati, 5% otopina fenola - nakon 6 sati.

Faktori patogenosti mikobakterija:

Faktor vrpce je glikolipid stanične stijenke koji uzrokuje oštećenje staničnih membrana i inhibira stvaranje fagolizosoma, uzrokujući razvoj nepotpune fagocitoze;

Lipidi koji sadrže mikolnu i ftionsku kiselinu uzrokuju pojavu brojnih divovskih stanica;

Uzročnici tuberkuloze ne proizvode egzotoksine. Proizvodi razgradnje ćelija su veoma toksični.

Glavni faktor u patogenosti mikobakterija je faktor vrpce (ime dolazi od engleskog cord - tourniquet, konopac). Faktor pupčane vrpce određuje „natrpani tip rasta“ u tečnim medijima u obliku „upletenih niti“ (ili pletenica), u kojima su mikobakterijske ćelije raspoređene u paralelne lance.

Epidemiologija. Tuberkuloza je široko rasprostranjena. Glavni izvor infekcije je bolesna osoba od respiratorne tuberkuloze, ispuštajući mikrobe u okolinu sa sputumom. Izvori infekcije mogu biti i osobe sa vanplućnim oblicima tuberkuloze i bolesne životinje (goveda, deve, svinje, koze i ovce). Glavni mehanizam infekcije– aerogena. Putevi prenošenja patogena - u vazduhu I vazdušna prašina. Ulazna kapija su sluznica usne duplje, bronhija i pluća. Rjeđe se infekcija tuberkulozom može javiti prehrambenim (prehrambenim) putem konzumiranjem termički neobrađenog mesa i mliječnih proizvoda. Dostupan kontakt-domaćinstvo put prenošenja zaraze sa oboljelih od tuberkuloze korištenjem zaražene odjeće, igračaka, knjiga, posuđa i drugih predmeta. Poznati su slučajevi infekcije ljudi tokom njege bolesnih životinja.

Patogeneza. Nakon prodiranja u ljudsko tijelo, mikobakterije se fagocitiraju.

IN U fagocitima se formiraju fagosomi unutar kojih mikobakterije ostaju žive i razmnožavaju se. U fagocitima, mikobakterije se transportuju u regionalne limfne čvorove, ostajući dugo vremena u "uspavanom" stanju (nepotpuna fagocitoza). Ovo uzrokuje upalu limfnog trakta ( limfangitis) i limfni čvorovi (limfadenitis). Na mjestu prodiranja patogena formira se žarište upale. Tokom nekoliko sedmica, ova upala postaje specifična (razvija se reakcija preosjetljivosti odgođenog tipa), što rezultira stvaranjem granuloma. Nakon toga, makrofagi se transformišu u epitelne ćelije. Kada se epiteloidne ćelije spoje, formiraju se gigantske multinuklearne ćelije. Oko izvora upale formira se kapsula vezivnog tkiva, a nekrotična tkiva se kalcificiraju. Kao rezultat toga dolazi do formiranja primarni kompleks tuberkuloze, unutar kojeg se nalazi kazeozno nekrotično tkivo i ostaju žive mikobakterije.

Klinika. Period inkubacije traje od 3-8 sedmica do 1 godine ili više.

Kliničke manifestacije tuberkuloze su raznolike, jer mikobakterije mogu zahvatiti bilo koji organ (crijeva, genitourinarni organi, koža, zglobovi). Simptomi tuberkuloze su umor, slabost, gubitak težine

tijelo, dugotrajna slaba temperatura, obilno noćno znojenje, kašalj sa krvavim sputumom, otežano disanje. Ne postoje simptomi jedinstveni za tuberkulozu. Kada je koža oštećena, uočavaju se ulcerisane lezije. Kod tuberkuloze kostiju i zglobova javljaju se lezije koje su karakteristične za artritis bilo koje etiologije: stanjivanje hrskavice, pojava bodlji, sužavanje zglobnih šupljina.

Imunitet. Imunitet protiv tuberkuloze nastaje kao odgovor na prodor mikobakterija u organizam tokom infekcije ili vakcinacije i nesterilnog je karaktera, što je posledica dugotrajnog opstanka bakterija u organizmu. Pojavljuje se 4-8 sedmica nakon što mikrobi uđu u tijelo. Formira se i ćelijski i humoralni imunitet.

Ćelijski imunitet manifestira se kao stanje povećane osjetljivosti (senzibilizacija). Zahvaljujući tome, tijelo stječe sposobnost da brzo veže novu dozu patogena i uklanja ga iz tijela: T-limfociti prepoznaju stanice zaražene mikobakterijama, napadaju ih i uništavaju.

Humoralni imunitet manifestira se sintezom antitijela na mikobakterijske antigene. Formiraju se cirkulirajući imuni kompleksi (CIC) koji pomažu u uklanjanju antigena iz tijela.

Imunitet na tuberkulozu traje sve dok je patogen prisutan u tijelu. Takve imunitet se naziva nesterilnim ili zarazne. Nakon što se tijelo oslobodi mikobakterija, imunitet brzo nestaje.

Mikrobiološka dijagnostika. Materijal koji se ispituje je sputum,

bronhijalni aspirat, fistulasti iscjedak, likvor, urin, izmet. Najčešće se ispituje sputum. Za dijagnosticiranje tuberkuloze koriste se osnovne i dodatne metode istraživanja.

Osnovne metode:

- bakterioskopska metoda (svetlosna i fluorescentna mikroskopija);

- bakteriološka metoda.

Dodatne metode:

- biološka metoda;

- serološka metoda;

- kožni alergijski testovi;

- molekularna biologija metoda (PCR).

Bakterioskopski pregled – ovo je ponovljena direktna mikroskopija razmaza sa ispitivanog materijala, obojenog prema Ziehl-Neelsenu. Pojedinačni mikroorganizmi se mogu otkriti u preparatima ako sadrži najmanje 1 ml sputuma 10000-100000 bakterijske ćelije (ograničenje metode). Ova metoda se primjenjuje:

- kod pregleda osoba sa simptomima sumnjivim na tuberkulozu (kašalj sa produkcijom sputuma duže od 3 sedmice, bol u grudima, hemoptiza, gubitak težine);

- kod osoba koje su bile u kontaktu sa bolesnicima od tuberkuloze;

- kod osoba sa rendgenskim promjenama na plućima sumnjivim na tuberkulozu.

Ako se dobiju negativni rezultati, pribjegavaju metodama materijalnog obogaćivanja: centrifugiranje(sedimentacija) i flotacija. Najčešće se koristi metoda flotacije.

Metoda centrifugiranja– ispitivani materijal se tretira alkalijom i centrifugira. Od sedimenta se priprema preparat za mikroskopiju.

Metoda flotacije - materijal koji se proučava obrađuje se mješavinom alkalija i ksilena (benzin, benzol, toluen). Uzorak se snažno mućka 10-15 minuta, dodaje se destilovana voda i drži 1-2 sata na sobnoj temperaturi. Kapljice ugljikohidrata adsorbiraju mikobakterije i isplivaju na površinu, stvarajući pjenu na površini. Od nastale pjene priprema se preparat za mikroskopiju.

Bakteriološka istraživanja vrši se setvom ispitnog materijala (nakon tretmana sa 6-12% rastvorom sumporne kiseline) na 2-3 hranljiva podloga različitog sastava istovremeno. Kao ubrzane metode bakteriološke dijagnostike, za smanjenje vremena izolacije i identifikacije patogena na 3-4 dana, koristi se metoda mikrokulture (Price method), kao i potpuno automatizirani komercijalni sistemi za uzgoj bujona VASTES MGIT 960 i MV/VasT. korišteno.

Bakteriološka metoda vam omogućava da dobijete čistu kulturu za određivanje njene virulentnosti i osjetljivosti na lijekove. Ova metoda se široko koristi za praćenje efikasnosti terapije.

Biološki uzorak je najosetljiviji, jer vam omogućava da detektujete od 1 do 5 mikrobnih ćelija u test materijalu. Metoda se koristi prilikom pregleda biopsijskog materijala, kao i kada se dobiju negativni rezultati korištenjem prve dvije metode istraživanja. Da bi se to postiglo, zamorcima se subkutano ili intraperitonealno ubrizgava ispitni materijal (1 ml). Nakon 1-2 mjeseca, životinje razvijaju generaliziranu tuberkulozu sa smrtnim ishodom.

Serološka metoda. Predloženi su RSK, RNGA, enzimski imunosorbentni test, imunoblotiranje i određivanje CEC-a.

Tuberkulinska dijagnostika temelji se na određivanju povećane osjetljivosti organizma na tuberkulin (kao rezultat infekcije uzročnicima tuberkuloze ili specifične vakcinacije) pomoću kožnih alergijskih testova. Tuberkulin se koristi za izvođenje kožnog alergijskog testa. Tuberkulin je opći naziv za lijekove dobivene od ljudskih ili goveđih mikobakterija:

- stari Koch tuberkulin - ATK (Alt Tuberculin Koch), prvi je dobio R. Koch 1880. godine. To je filtrat autoklavirane 5-6-sedmične bujonske kulture Mycobacterium tuberculosis;

- suhi prečišćeni tuberkulin - PPD (Purified Protein Derivative),

dobijene iz kultura M. tuberculosis i M. bovis;

- prečišćeni tuberkulin koji je pripremio M.A. Linnikova(PPD-L) iz kultura M. tuberculosis i M. bovis.

Za dijagnosticiranje tuberkuloze u početku je korišten Pirquet kožni test (skarifikacijski test). Trenutno, u cilju blagovremenog identifikovanja

koristi se primarna infekcija djece i adolescenata intradermalni Mantoux test. Prilikom izvođenja Mantoux testa, tuberkulin (PPD) se injektira striktno intradermalno na unutrašnju površinu srednje trećine podlaktice sve dok se ne formira “dugme”. Rezultati testa se uzimaju u obzir nakon 48-72 sata na osnovu prisustva papule. Mantoux test se ocjenjuje na sljedeći način:

- negativan - prisutnost reakcije od injekcije do 2 mm u promjeru;

- upitno - prečnik papule 2-4 mm ili hiperemija;

- pozitivno - prečnik papule 5-17 mm kod djece i adolescenata i 5-21 mm

kod odraslih;

- hiperergična - papula promjera većeg od 17 mm kod djece i adolescenata i više od 21 mm kod odraslih.

Tuberkulinska reakcija postaje pozitivna 4-6 sedmica nakon infekcije ili vakcinacije. Nakon vakcinacije, pozitivne reakcije na tuberkulin traju 3-7 godina. Pozitivan rezultat ne treba smatrati znakom aktivnog procesa. Pozitivan Mantoux test ukazuje da je osoba prethodno bila zaražena mikobakterijama. Osobe s pozitivnim tuberkulinskim testovima su u opasnosti od bolesti kao rezultat aktivacije primarnog fokusa. Ako kod odraslih pozitivna reakcija ukazuje na infekciju, onda kod djece koja ranije nisu odgovorila na tuberkulin, pojava prve registrirane pozitivne reakcije ( tuberkulinski test okret) ukazuje na nedavnu infekciju i služi kao indikacija za klinički pregled i liječenje.

Ako je reakcija negativna, ne postoji rizik od aktivacije primarnog žarišta, ali postoji rizik od primarne infekcije. Negativan test se opaža kod zdravih neinficiranih osoba, kao i kod pacijenata sa srednjim oblicima tuberkuloze.

Za ekspresna dijagnostika tuberkuloze, RIF se koristi upotrebom monoklonskih antitijela specifičnih za vrstu, metodom laserske fluorescencije, mikrobiočipovima, kao i PCR-om, što može smanjiti istraživanje na 2 dana.

Tretman. Antibiotska terapija je glavna metoda liječenja tuberkuloze. Prema stepenu efikasnosti, lekovi protiv tuberkuloze se dele u 3 grupe:

Grupa A - najefikasniji lijekovi: izoniazid (antimetabolit, analog izonikotinske kiseline, inhibira sintezu enzima uključenih u sintezu mikolnih kiselina, koje su dio ćelijskog zida mikobakterija), rifampicin i njihovi derivati. Dobiveni su lijekovi koji imaju superiorna ljekovita svojstva od rifampicina (rifapentin i rifabutin), kao i kombinovani lijekovi (rifater, rifang itd.);

Grupa B - lijekovi prosječne efikasnosti: etambutol (sintetički lijek, inhibira enzime uključene u sintezu ćelijskog zida mikobakterija, aktivan je samo protiv bakterija koje se razmnožavaju), kanamicin, streptomicin, cikloserin, etionamid (protionamid), pirazinamid, fluorimicinomid derivati;

Grupa C - mali lijekovi protiv tuberkuloze (PAS i Tibon ili Thiocetozone). Ova grupa lijekova se ne koristi u ekonomski razvijenim zemljama i Rusiji.

Vrlo brzo se pojavljuju sojevi mikobakterija otpornih na lijekove protiv tuberkuloze. Stoga se koriste kombinacije lijekova s različitim mehanizmima djelovanja, a lijekovi se također često zamjenjuju. To usporava pojavu rezistentnih oblika. U savremenim režimima lečenja istovremeno se koristi 3-5 lekova (tri- do petkomponentni režimi lečenja).

Specifična prevencija. Specifična prevencija se sprovodi davanjem žive BCG vakcine (BCG - Bacille Calmette-Guerin). BCG soj su 1919. godine odabrali A. Calmette i C. Guerin kroz dugotrajno pasažiranje M. bovis on krompir-glicerinsredine sa dodatkom žuči.

Vakcinacija se provodi kod novorođenčadi 3-7 dana života intradermalno. Na mjestu primjene cjepiva formira se infiltrat s malim čvorom u centru. Povratni razvoj infiltrata se javlja u roku od 3-5 mjeseci. Revakcinacija se provodi u dobi od 7 i 14 godina za osobe s negativnom Mantoux reakcijom, stoga se prije nje radi Mantoux test. Kod novorođenčadi sa smanjenom rezistencijom i u regijama slobodnim od tuberkuloze koristi se manje reaktogena BCG-M vakcina koja sadrži 2 puta manje mikroba.

Nakon diskusije Za teorijska pitanja nastavnik objašnjava proceduru izvođenja samostalnog rada.

Samostalni rad:

1. Učenici pripremaju preparate od kultura nepatogenih mikobakterija, boje ih prema Ziehl-Neelsen, mikroskopija, skicirajte mikroskopsku sliku u radnoj svesci.

2. U svojoj radnoj svesci učenici skiciraju dijagram laboratorijske dijagnoze tuberkuloze.

7. Provjera znanja, vještina i sposobnosti na temu nastavnog časa:

Odgovori na pitanja i aktivnosti na času ocjenjuju se po sistemu od 5 bodova.

8. Literatura za pripremu teme:

8.1. Glavni:

1. Galynkin V., Zaikina N., Kocherovets V. Osnove farmaceutske mikrobiologije. 2008.

2. Medicinska mikrobiologija, virologija i imunologija: udžbenik za studente medicine. Ed. AA. Vorobyov. Udžbenici i udžbenici pomagala za visoko obrazovanje. Izdavač: Medicinsko-informativna agencija, 2012. – 702 str.

3. Mikrobiologija: udžbenik. za studente visokih institucija. prof. obrazovanje, studenti specijalnosti 060301.65 “Farmacija” / ur. V.V. Zvereva, M.N. Boychenko. – M.: GEOTAR-Media, 2012. – 608 str.: ilustr.

4. Odegova T.F., Oleshko G.I., Novikova V.V. Mikrobiologija. Udžbenik za farmaceutske univerzitete i fakultete. - Perm, 2009. - 378 str.

8.2. Dodatno:

1. Korotyaev A.I. Medicinska mikrobiologija, imunologija i virologija: Udžbenik za studente medicine. univerziteti / A.I. Korotyaev, S.A. Babichev. - 5. izdanje, rev. I

dodati. – Sankt Peterburg: SpetsLit, 2012. – 759 str.: ilustr.

2. Medicinska mikrobiologija: udžbenik. 4th ed. Pozdeev O.K. / Ed. IN AND. Pokrovski. – 2010. – 768 str.

3. Priručnik za medicinsku mikrobiologiju. Opća i sanitarna mikrobiologija. Knjiga 1 / Zb. autori // Uredili Labinskaya A.S., Volina E.G. – M.: Izdavačka kuća BINOM, 2008. – 1080 str.: ilustr.

Smjernice je revidirao i dopunio profesor N.V. Litusov.

Razgovarano na sastanku Katedre za mikrobiologiju, virusologiju i imunologiju.

Uzročnik su mikroorganizmi iz roda mikobakterija (mikos - gljiva, bakterija - štapić), uključuje mnoge vrste (49), kako patogene tako i nepatogene. Patogeni uključuju mikobakterije koje uzrokuju tuberkulozu kod ljudi (myc.tuberculosis), životinja (myc.bovis), ptica (myc.avium-intracellulare), miševa (myc. murium).

Uz prave patogene iz životinja i ljudi, iz objekata okoliša izoluju se i takozvane atipične, neklasificirane, anonimne mikobakterije, koje se po svojim svojstvima razlikuju od tuberkuloze i jedna od druge.

Tuberkuloza je zarazna, kronična bolest ljudi i životinja, uključujući ptice, posebno kokoši. Patološki je karakterizirana stvaranjem tuberkula (tuberkula) i zgrušano-degeneriranih tuberkuloznih žarišta. Uzročnike tuberkuloze kod ljudi i goveda otkrio je R. Koch 1882. Ptičiju vrstu su ustanovili Strauss i Gamaleya (1891).

Morfologija. Mycobacterium tuberculosis je mikroorganizam otporan na kiseline, alkohol i alkalije, nepokretan, ne stvara spore ili kapsule i nema flagele. Njihov tipičan oblik su vitki ili blago zakrivljeni štapići sa zaobljenim rubovima. U elektronskom mikroskopu, mikobakterije svih vrsta imaju izgled štapića sa zaobljenim rubovima. Međutim, često se nalaze zakrivljeni i ovalni oblici. Veličine ćelija iste kulture mogu značajno varirati - dužina od 1,5 do 4 µm, širina od 0,2 do 0,5 µm. Ovo je posebno uočljivo u kulturama različite starosti. Utvrđena je filogenetska blizina tuberkuloznih mikobakterija sa blistavim gljivama-aktinomicetama. Ova sličnost se očituje u sporom razvoju mikobakterija na selektivnim hranljivim podlogama, kao i u načinu razmnožavanja, polimorfizmu i sposobnosti da, pod određenim uslovima, ponekad formiraju filamentozne razgranate forme sa oteklinama u obliku bočice na krajevima, što podseća na aktinomiceti. To je bio razlog da se naziv Kochovog bacila zamijeni sa Mycobacterium tuberculosis (myc.tuberculosis).

Mikobakterije se odlikuju visokim sadržajem lipida (od 30,6 do 38,9%), zbog čega polako prihvataju anilinske boje. Njihovo bojenje se postiže upotrebom koncentriranog karbonskog fuksina kada se zagrijava. Ovom metodom bojenja Mycobacterium tuberculosis je dobro zadržava i ne gubi boju kada je izložena razrijeđenim kiselinama, lužinama i alkoholom, po čemu se razlikuju od drugih mikroba. Ovo je osnova za Ziehl-Neelsenovu metodu bojenja i diferencijacije mikobakterija.

Mikobakterije se teško boje Gramom i izgledaju tamnoljubičaste.

U kulturama izolovanim od goveda češće se nalaze sferne formacije pravilnog oblika i iste veličine, kao i odvojeno ležeće filamentolike strukture.

Uzgoj. Mycobacterium tuberculosis je sposoban da se razmnožava u strogo aerobnim uslovima na odgovarajućim selektivnim hranljivim medijima koji sadrže ugljenik, azot, vodonik i kiseonik u određenim jedinjenjima. Od mineralnih materija vitalni su magnezijum, kalijum, sumpor i fosfor. Soli željeza i neki drugi elementi stimulativno djeluju na rast tuberkuloznih mikobakterija. Za sprovođenje biohemijskih procesa u mikobakterijama neophodan uslov je optimalna temperatura: 37-38 0 C za ljudsku vrstu, 38-39 0 C za goveda i 39-41 0 C za ptičje vrste. Treba napomenuti da Mycobacterium tuberculosis karakteriše spor metabolizam, te ih stoga karakteriše spor rast kultura na podlozi. Njihov rast se javlja nakon 7-30 dana ili više.

Prilikom odabira podloge treba uzeti u obzir njegovu namjenu: za ponovno sjetvu i očuvanje subkultura, bolje je koristiti jednostavne podloge koje sadrže glicerol (MPGB, glicerinski krompir). Za primarnu izolaciju kultura dokazale su se samo guste jajne podloge (Petragnani, Gelberg, itd.). Za rad na proučavanju biohemije mikobakterija i druge svrhe, preporučljivo je koristiti sintetičke podloge bez proteina (Soton, Model).

Na čvrstim podlogama mikobakterije rastu u obliku kolonija, koje mogu biti glatke (S-forma) ili bradavičaste (R-forma), male ili velike, sjajne ili zatamnjene, u obliku izolovanih kolonija ili u obliku kontinuiranih premaz, u obliku bijele ili bijele sa žutom nijansom, ili druge boje.

Biohemijska svojstva. Mycobacterium tuberculosis sadrži različite enzime. Enzimi esteraze i lipaze razgrađuju masti, što omogućava mikobakterijama da ih koriste kao nutritivni materijal. Dehidraze razgrađuju organske kiseline, uključujući aminokiseline. Ureaza razgrađuje ureu, perigaloza razgrađuje ugljikohidrate, a katalaza razgrađuje vodikov peroksid.

Proteolitički enzimi (proteaze) razgrađuju proteine. Mikobakterije fermentiraju alkohol, glicerol i brojne ugljikohidrate, lecitin i fosfatide. Mlade mikobakterije tuberkuloze imaju izrazito izražena redukcijska svojstva, što se posebno očituje u njihovoj sposobnosti obnavljanja telurita.

Mycobacterium tuberculosis ima značajnu otpornost na hemijske i fizičke uticaje, posebno na sušenje. U osušenom sputumu, komadićima zahvaćenog tkiva i prašini, mikobakterije su održive 2 do 7 mjeseci ili više. Mikrob preživljava u vodi 5 mjeseci, u tlu - 7 mjeseci, a kada materijal trune - 76-167 dana ili duže. Hladnoća ne utiče na održivost mikobakterija.

Mikobakterije su vrlo osjetljive na direktnu sunčevu svjetlost, u vrućim danima u sputumu umiru za 1,5-2 sata.Ultraljubičasti zraci su posebno destruktivni za mikobakterije. Visoka osjetljivost mikobakterija na toplinu je od velikog značaja u sanitarnom i preventivnom smislu. U vlažnom okruženju mikobakterije umiru na 60 0 C 1 sat, na 65 0 C - nakon 15 minuta, na 70-80 0 C - nakon 5-10 minuta. U svježem mlijeku uzročnik tuberkuloze traje 9-10 dana, u kiselom mlijeku umire pod utjecajem mliječne kiseline. Mikobakterije opstaju u ulju nedeljama, a u nekim sirevima čak i mesecima. Mycobacterium tuberculosis, u poređenju sa drugim bakterijama koje ne stvaraju spore, mnogo je otpornija na hemijska dezinfekciona sredstva; 5% rastvor fenola i 10% rastvor lizola uništavaju patogena nakon 24 sata, 4% formaldehid nakon 12 sati.

Preporučuju se sljedeća sredstva za dezinfekciju tuberkuloze: 15% otopina mješavine pripremljene od jednakih dijelova sumporne karbonske kiseline i 16% otopine natrijum hidroksida, vrijeme izlaganja do 4 sata; 3% alkalni rastvor formaldehida sa 3-strukim nanošenjem na predmet i 3-satnom ekspozicijom; izbjeljivač u obliku praha, otopina i suspenzija koji sadrže najmanje 5% aktivnog hlora uz izlaganje najmanje 3 sata; 3-5% rastvor hloramina B, hipohlor, 1% rastvor glutaraldehida, 8,5% emulzija fenosmolina u količini od 1 l/m2 i sa ekspozicijom od 3 sata itd.

Patogenost. Mikobakterije goveda su patogene za mnoge životinje (krave, ovce, koze, svinje, konji, mačke, psi, jeleni, jeleni itd.). Od laboratorijskih životinja najosjetljiviji su zečevi i zamorci kod kojih se razvija generalizirana tuberkuloza.

Ptičije mikobakterije uzrokuju tuberkulozu kod pilića, ćurki, biserki, fazana, paunova, golubova, pataka itd. U prirodnim uslovima domaće životinje (konji, svinje, koze, ovce, a ponekad i goveda) se inficiraju ptičjim mikobakterijama Human.

Period inkubacije traje od nekoliko sedmica do nekoliko godina. Dokazano je postojanost L-forma u organizmu, koji imaju sposobnost da se vrate u tipične mikobakterije. Prisustvo L-oblika smatra se uzrokom relapsa tuberkuloze kod zdravih stada (V.S. Fedoseev, A.N. Baigazanov, 1987).

Laboratorijska dijagnostika. Teško je izolovati uzročnika tuberkuloze u čistom obliku. Uspjeh u velikoj mjeri ovisi o prirodi materijala koji se proučava. Kao potonje možete koristiti zahvaćene organe i tkiva, gnoj, mlijeko, puter, svježi sir, mokraću, izmet, stajnjak, zemlju, vodu, strugotine sa raznih objekata stočarskih objekata itd. U svakom slučaju, prije sjetve potrebno je odabrati odgovarajući način obrade materijala koji se proučava.

Za uklanjanje strane mikroflore, materijal za ispitivanje (mlijeko, urin, sluz, zahvaćeni organi i tkiva) tretira se 6-10% otopinom sumporne kiseline (Ghon metoda). Ukupan uticaj rastvora sumporne kiseline na materijal ne bi trebalo da prelazi 25-30 minuta.

Za preradu tečnog, polutečnog materijala i struganja iz životinjskih staništa koristi se metoda flotacije. Suština metode je da se ispitivani materijal promućka u tikvici s ugljikovodicima (benzen, benzin, itd.), a plutajući sloj pjene, odnosno flotat koji sadrži mycobacterium tuberculosis, koristi se za pripremu razmaza, inokulaciju hranjivih tvari. medija i zaraze laboratorijskih životinja.

Kada se zakolju životinje koje pozitivno reagiraju na tuberkulin i nema patoloških promjena u limfnim čvorovima, tkivima i organima tuberkulozne prirode, trupovi se puštaju bez ograničenja, kože - bez dezinfekcije.

Mlijeko krava koje nisu oboljele od tuberkuloze neutrališe se na farmi na 90 0 C u trajanju od 5 minuta ili na 85 0 C u trajanju od 30 minuta, nakon čega se šalje u mljekaru, gdje se podvrgava ponovnoj pasterizaciji u normalnim uslovima. Zabranjena je prodaja mlijeka i mliječnih proizvoda na tržištu sa farmi koje nisu zaražene tuberkulozom i od klinički bolesnih i pozitivnih životinja u privatnom sektoru.

Cijeli trup i svi ostali proizvodi klanja se šalju na zbrinjavanje u dva slučaja: prvi - kada su trupovi nemasne masti, bilo koji oblik tuberkuloznog oštećenja organa ili limfnih čvorova, drugi - kada se otkrije generalizirani proces tuberkuloze, bez obzira na debljine.

Alergijska dijagnoza tuberkuloze. U praksi je alergijska dijagnostika upotrebom tuberkulina od vodećeg značaja za intravitalno prepoznavanje tuberkuloze kod životinja i ptica (R. Koch, 1890). Treba istaći da je i prije Kohove poruke u Rusiji, Gelman 1888-1889. pripremio ekstrakt iz bakterija tuberkuloze i testirao ga u dijagnostičke svrhe na kravama oboljelim od tuberkuloze, dajući pozitivan rezultat. Dijagnostika primjenom tuberkulina zadobila je jaku poziciju u medicini i veterini. Trenutno, glavna metoda testiranja životinja na tuberkulozu je intradermalni tuberkulinski test. Za proizvodnju tuberkulina za sisare koriste se sojevi samo jedne vrste goveda. Koristi se suhi prečišćeni tuberkulin (protein purified derivat - PPD).

Imunitet i sredstva specifične prevencije. Kod tuberkuloze je nesterilan, traje sve dok u organizmu ima živih mikobakterija tuberkuloze.

Vakcinu protiv tuberkuloze predložili su 1924. francuski naučnici Calmette i Guerin.

U veterinarskoj praksi, BCG vakcina se koristi na farmama koje nisu zahvaćene tuberkulozom u skladu sa uputstvima odobrenim 1985. godine (M.A. Safin).

Sadržaj članka

Mycobacterium tuberculosis

Uzročnici tuberkuloze kod ljudi su M. tuberculosis (više od 90% svih slučajeva infekcije tuberkulozom, M. bovis (5%) i M. africanum (oko 3%, uglavnom među stanovništvom tropskih afričkih zemalja). Tuberkulozu je otkrio R. Koch 1882. godine

Morfologija i fiziologija

Mycobacterium tuberculosis je gram-pozitivna ravna ili blago zakrivljena šipka. Sastav mikobakterija uključuje lipide (10-40%), mikolnu, ftionsku, tuberkulostearinsku i druge masne kiseline. Strukturni skelet ćelijskog zida mikobakterije sastoji se od dva kovalentno vezana polimera - arabinogalaktazan mikolata i peptidoglikana, za koje su vezani proteini, polisaharidi i lipidi. Ovako složen hemijski kompleks sa visokim sadržajem lipida daje ćelijama Mycobacterium tuberculosis niz karakterističnih svojstava: otpornost na kiseline, lužine i alkohol, kao i hidrofobnost. Za bojenje bacila tuberkuloze koristi se Ziehl-Neelsenova metoda. U usjevima postoje zrnasti oblici, granasti, Mukha zrna - sferna, kiselo kompatibilna, lako se boje po Gramu. Moguć je prijelaz na filtrirane i L-forme. Oni su nepokretni, ne stvaraju spore ili kapsule. Za uzgoj tuberkuloznih mikobakterija u laboratorijskim uvjetima koriste se posebne hranljive podloge koje sadrže jaja, glicerin, krompir, asparagin, vitamine i soli. Najčešće korišteni su Lowenstein-Jensen medij za jaja i Soton sintetički medij. Mycobacterium tuberculosis se sporo razmnožava. U optimalnim uslovima, vreme generisanja je oko 15 sati, dok se bakterije mnogih drugih rodova dele svakih 20-30 minuta. Rast tuberkuloznih mikobakterija može se otkriti nakon 2-3 sedmice, a kasnije - do 2-3 mjeseca, posebno u prvim generacijama. Na gustom mediju formiraju se naborane, suhe kolonije s neravnim rubovima; u tečnim medijima na površini se stvara delikatan film koji se zgušnjava i pada na dno, a medij ostaje proziran. Da bi se postigao homogeniji rast mikobakterija, hranljivim podlogama dodaje se Tween - 80 (surfaktant).

Antigeni

Antigeni mikobakterija sadrže proteine, polisaharide, lipide i fosfatide. Antitijela na njih određuju se RSK, RNGA i precipitacijom gela. Postoje opšti i specifični antigeni u M. tuberculosis, M. bovis i drugim mikobakterijama, uključujući i saprofitske vrste.Patogenost tuberkuloznih mikobakterija povezana je sa direktnim ili imunološki posredovanim štetnim dejstvom lipida (vosak D, muramindipeptid, ftionske kiseline), kao npr. kao i tuberkulin. Njihovo djelovanje se izražava u razvoju specifičnih granuloma i oštećenja tkiva. Virulentne sojeve karakterizira prisustvo takozvanog faktora vrpce - glikolipida koji se sastoji od trehaloze i dimikolata. Uništava mitohondrije ćelija zaraženog organizma, čime se narušava respiratorna funkcija. Mikobakterije ne proizvode egzotoksin.

Patogeneza

U zoni prodiranja i razmnožavanja mikobakterija pojavljuje se specifično žarište upale - infektivni granulom (primarni učinak). Tada se razvija specifičan upalni proces u regionalnim limfnim čvorovima i uočava se senzibilizacija organizma. Tako nastaje takozvani primarni tuberkulozni kompleks. U velikoj većini slučajeva primarna lezija ima benigni tok. Otapa se, zahvaćeno područje kalcificira i ostavlja ožiljke. Međutim, ovaj proces se ne završava potpunim oslobađanjem tijela od patogena. U primarnom žarištu i limfnim čvorovima, bakterije tuberkuloze mogu postojati dugi niz godina, ponekad i cijeli život. Takvi ljudi, dok ostaju zaraženi, stiču imunitet na tuberkulozu. U slučaju nepovoljnih bolesti, posebno na pozadini loših društvenih faktora (nedovoljna i neadekvatna ishrana, nezadovoljavajući uslovi života, prateće bolesti), može doći do aktivacije patogena i generalizacije procesa. Tuberkuloza pluća je najčešća. Generalizacija infekcije dovodi do razvoja ekstrapulmonalnih oblika tuberkuloze: kože, kostiju i zglobova, bubrega i drugih organa. Lokalizacija procesa u određenoj mjeri ovisi o putevima prodiranja mikobakterija u ljudsko tijelo i vrsti patogena. Patogenetski je važno dejstvo tuberkulina na organizam zaražene osobe. Ovu supstancu je prvi nabavio R. Koch 1890. godine, a lijek koji je proučavao zvao se “stari tuberkulin”. Prečišćeni tuberkulin (PPD - purified protein derivat) je protein. Intradermalna primjena tuberkulina uzrokuje lokalnu inflamatornu reakciju u obliku infiltracije i crvenila (Mantouxova reakcija) kod osoba zaraženih mikobakterijama. Neinficirani ljudi ne pokazuju nikakvu reakciju na uvođenje tuberkulina. Ovaj test se koristi za identifikaciju zaraženih, senzibiliziranih ljudi.

Imunitet

Kod tuberkuloze imunitet se formira na pozadini primarne infekcije tijela mikobakterijama, koje ostaju u njemu dugo vremena. Ovaj oblik imuniteta naziva se nesterilnim i izražava se u otpornosti organizma na superinfekciju. Osim toga, dugotrajna perzistencija mikobakterija u organizmu povezana je sa L-transformacijom patogena tuberkuloze, kao i sa širokom upotrebom žive avirulentne BCG vakcine za vakcinaciju stanovništva. Kod tuberkuloze se otkrivaju antitijela koja pripadaju različitim klasama imunoglobulina. Antitijela se mogu otkriti različitim serološkim reakcijama (RSK, RPGA, itd.). Njihov značaj u formiranju antituberkuloznog imuniteta i dalje je nejasan. Vjeruje se da su antitijela na mikobakteriju tuberkuloze samo "svjedoci" imuniteta, nemaju inhibitorni učinak na patogen i ne odražavaju njegov intenzitet. Ćelijski imunitet je od velike važnosti. Pokazatelji njegovih promjena, sudeći po reakciji blastne transformacije limfocita, citotoksičnom djelovanju limfocita na "ciljne" stanice koje sadrže mikobakterijske antigene, te težini reakcije inhibicije migracije makrofaga, adekvatni su toku bolesti. . T-limfociti, nakon kontakta sa mikobakterijskim antigenima, proizvode imunocitokine koji pojačavaju fagocitnu aktivnost makrofaga. Kada je funkcija T-limfocita potisnuta, tuberkulozni proces se javlja u težem obliku. Fagocitoza kod tuberkuloze je nepotpuna, jer se mikobakterije mogu razmnožavati u makrofagima i djelomično ih uništiti. Očuvanje živih mikobakterija u tkivima obezbeđuje povećanu otpornost na superinfekciju, kao i „imunološko pamćenje“. Alergija, koja se razvija kao i HNL, važna je u formiranju imuniteta kod tuberkuloze. Zaštitna uloga HNL-a očituje se u ograničavanju proliferacije mikobakterija, njihovom fiksiranju u žarištima infekcije i stvaranju infektivnih granuloma uz sudjelovanje T-limfocita, makrofaga i drugih stanica.

Ekologija i epidemiologija

U prirodnim uslovima, M. tuberculosis živi u tijelu svojih domaćina - ljudi i nekih životinja (goveda, svinje). M. africanum uzrokuje tuberkulozu kod ljudi u tropskoj Africi. Dakle, izvor infekcije su bolesni ljudi i životinje. Kod aktivne tuberkuloze uz prisustvo upalno-destruktivnih promjena oslobađaju mikobakterije u okoliš. Više od 80% populacije je inficirano mikobakterijom tuberkuloze u ranoj dobi. Najčešći put zaraze je zračni, pri čemu patogen ulazi u tijelo kroz gornje disajne puteve, ponekad kroz sluznicu probavnog trakta ili kroz oštećenu kožu. Jednom u životnoj sredini, Mycobacterium tuberculosis zadržava svoju održivost dugo vremena. Tako u osušenom ispljuvku opstaju nekoliko sedmica, na predmetima koji okružuju pacijenta (platnene, knjige) više od 3 mjeseca, u vodi više od godinu dana, u zemljištu do 6 mjeseci i dugo se čuvaju. u mliječnim proizvodima. Mycobacterium tuberculosis je otporniji na djelovanje dezinficijensa od drugih bakterija; za njihovo uništavanje potrebne su veće koncentracije i duže vrijeme izlaganja. Kada se prokuvaju, odmah umiru i osjetljivi su na direktnu sunčevu svjetlost.

Tuberkuloza

Tuberkuloza- primarna kronična zarazna bolest ljudi i životinja uzrokovana patogenim mikobakterijama. U zavisnosti od lokacije lezije, razlikuje se tuberkuloza pluća, kože, limfnih čvorova, moždanih ovojnica, kostiju i zglobova, genitourinarnog sistema i trbušne duplje. Savremeni period karakteriše porast morbiditeta, teži tok, porast mortaliteta i pojava značajnog broja sojeva otpornih na mnoge antituberkulozne lekove.U Ukrajini tuberkulozu kod ljudi najčešće izaziva Mycobacterium tuberculosis MI. . bovis. Vrlo rijetko ovu bolest uzrokuje avium. U Africi, Americi i drugim kontinentima bolesti slične tuberkulozi izazivaju M africanum, M. asiaticum, M. kansasii, M. fortuitum, M. ulcerans, itd. Ove bolesti se nazivaju mikobakterioza. Još jedan predstavnik roda mikobakterija, M leprae, je uzročnik lepre. Ukupno postoji više od 40 vrsta mikobakterija, od kojih su 24 patogene i potencijalno patogene.Laboratorijska dijagnostika tuberkuloze i mikobakterija uključuje mikroskopske, bakteriološke, biološke, serološke studije i alergijske testove. Glavna metoda je izolacija čiste kulture patogena, njena identifikacija i određivanje osjetljivosti na antimikrobne lijekove.

Uzimanje materijala za istraživanje

Patološki materijal je ispljuvak, sluz iz stražnjeg dijela ždrijela, pleuralni eksudat, gnoj, likvor, ispiranje bronha i želuca, urin, feces, punktati, rjeđe krv itd. Pacijent skuplja sputum u teglu ili džepnu pljuvačku. Najbolji rezultati se postižu pri pregledu sputuma prikupljenog u roku od 12 do 24 sata. Ostali materijali se sakupljaju u sterilne tegle ili epruvete. Na njih se lijepi naljepnica s prezimenom i inicijalima pacijenta, ambulantna registraciona grupa, svrha studije i šalju se u laboratorij. Prikupljeni klinički materijal smatra se potencijalno patogenim.

Bakterioskopska metoda

Razmazi se pripremaju direktno od sputuma ili sedimenta dobijenog nakon centrifugiranja homogeniziranog materijala. Sputum se prenosi u Petrijevu posudu postavljenu na tamnu pozadinu. Pincetom se odaberu mukopurulentna zrnca, prenesu na sredinu stakalca, prekrivena drugim stakalcem, a materijal se melje između čaša. Razmazi se takođe pripremaju od stajnjaka i punktata. Cerebrospinalnoj tečnosti se ostavi da se taloži 18-20 sati u frižideru, a rezultujuća delikatna fibrinska mreža se pažljivo ispravi na staklenu pločicu. Urin se centrifugira i od sedimenta se pripremaju brisevi. Upravo ovi razmazi se obezbojavaju ne samo kiselinom, već i alkoholom kako bi se razlikovale bakterije tuberkuloze od M. smegmatis, koje se mogu naći u urinu zdravih ljudi.Osušeni razmazi se fiksiraju suhom toplotom, bojeni Ziehl-Neelsen metodom ili sa auramin-rodaminom ili drugim fluorohromom. U preparatima obojenim po Ziehl-Neelsenu, uzročnik tuberkuloze ima izgled tankih čvrstih štapića rubin-crvene boje, lociranih pojedinačno ili u grupama, uglavnom izvan ćelija. Razmazi se boje auramin-rodaminom 15 minuta uz zagrijavanje, zatim se ispere vodom, potopi u hlorovodoničnu kiselinu i ponovo se dobro opere vodom. Ako u toku mikroskopije pozadina razmaza ima jaku fluorescenciju, potrebno ju je malo ugasiti 0,25% vodenim rastvorom metilen plavog, isprati vodom, osušiti i pregledati pod fluorescentnim mikroskopom. Bacili tuberkuloze svijetle zlatno na tamnozelenoj pozadini. Kao fluorohromi se koriste i auramin, akridin narandža, itd. Za identifikaciju L-forma mikobakterija pretežno se koristi fazno-kontrastna mikroskopija. Pozitivan odgovor se daje kada se bacili tuberkuloze otkriju u brisu nakon pregleda najmanje 100 vidnih polja , obavezno naznačite broj bakterija u svakom vidnom polju. Negativan rezultat mikroskopije ne daje pravo da se dijagnoza isključi.Značajan nedostatak bakterioskopske metode je njena niska osjetljivost: mikobakterije se mogu otkriti u brisu samo ako u 1 ml patološkog materijala ima 50-100 tisuća mikrobnih tijela. Osim toga, ova metoda ne može razlikovati uzročnika tuberkuloze od drugih mikobakterija i odrediti njegovu osjetljivost na kemoterapiju. Da bi se povećala učestalost pojave Mycobacterium tuberculosis u ispitivanom materijalu (posebno u sputumu), koriste se metode obogaćivanja - homogenizacija i flotacija.

Metoda homogenizacije

Dnevna porcija sputuma se dodaje u bocu, dodaje se jednaka zapremina 1% rastvora NaOH, dobro zatvara gumenim čepom i mućka u Schüttel aparatu 10-15 minuta dok se potpuno ne ukapni. Homogenizirana tečnost se centrifugira, dekantirani rastvor se sipa u rastvor hloramina, talog se neutrališe sa 2-3 kapi 10% rastvora hlorovodonične ili 30% sirćetne kiseline. Iz sedimenta se pripremaju razmazi, obojeni Ziehl-Neelsenom i pregledani pod mikroskopom.

Metoda flotacije

Deo sputuma (10-15 ml) se homogenizuje kao što je gore opisano. Tikvica ili boca s razrijeđenim materijalom stavlja se u vodeno kupatilo na 55°C na 30 minuta, zatim se dodaje 0,5-1 ml ksilena (benzen, benzin, toluen), mućka 10 minuta i ostavi pola sata. Ksilen, zajedno sa adsorbovanim mikobakterijama, ispliva na površinu i formira sloj nalik na vrh. Dodajte destilovanu vodu tako da se ovaj sloj uzdiže u grlo tikvice ili boce. Koristeći sterilnu Pasteurovu pipetu, dio ksilenskog sloja se prenosi na staklenu pločicu, zagrijanu na staklenoj ploči koja leži u vodenom kupatilu na temperaturi od 60 ° C. Osušeni razmaz je prekriven novim dijelom vershkopodibny materijala, osušen ponovo i tako ponavljajte sve dok se cijeli flotacijski sloj ne prenese na razmazivanje. Preparat se ispere etrom, osuši, fiksira suhom toplotom, boji Ziehl-Neelsenom i mikroskopski ispituje. Metode homogenizacije i flotacije povećavaju prisustvo Mycobacterium tuberculosis u ispitivanom materijalu za 10%. Štaviše, mogu se identifikovati ako se u 1 ml sputuma nalazi više od hiljadu mikrobnih tela.. Vode za pranje bronha i želuca mogu se ispitati dodatnom homogenizacijom ili flotacijom.

Bakteriološka dijagnostička metoda

Bakteriološka dijagnostička metoda je mnogo efikasnija od bakterioskopske. Omogućava vam da identifikujete 20-100 ili više mikobakterija u 1 ml test materijala. Koristi se ne samo za dijagnosticiranje bolesti, već i za praćenje efikasnosti kemoterapije, određivanje virulencije i rezistencije mikobakterija na antibiotike i druge antituberkulozne lijekove i identifikaciju izmijenjenih varijanti, posebno L-forma. Gotovo svi proučavani materijali su kod pacijenata sa tuberkulozom (osim krvi, cerebrospinalne tekućine) sadrže prateću mikrofloru. Stoga je nemoguće izolovati čistu kulturu mikobakterija bez prethodnog tretmana. Da bi se uništili strani mikroorganizmi, ispljuvak, gnoj, voda za ispiranje i drugi materijali se tretiraju 20 minuta na sobnoj temperaturi sa dvostrukom zapreminom 6% rastvora sumporne kiseline ili 10% rastvora trinatrijum fosfata na 37°C tokom 18-20 sati. Zatim se tretirani materijal centrifugira, tečni dio ocijedi, a talog neutralizira dodavanjem 1-2 kapi 3% otopine NaOH ili tri puta ispere od kiseline izotoničnim rastvorom natrijum hlorida.Nakon neutralizacije materijal inokulira se u 3-6 epruveta sa gustim Lowenstein-Jensenovim medijumom (krompirov skrob sa glicerinom, soli, suspenzija jaja i malahit zelena) i Finn-2, koji ima isti sastav kao prethodni, ali je u njemu asparagin zamenjen sa mononatrijum glutamat. Ove podloge preporučuje SZO kao standard u svim zemljama svijeta za primarno uzgajanje Mycobacterium tuberculosis i određivanje njihove rezistencije na kemoterapiju. Za ostale potrebe možete koristiti glicerinski bujon, Petragnani, Pavlovsky, Soton medijum.Cerebrospinalna tečnost, eksudat, krv, punktat se pipetiraju na hranljivu podlogu bez prethodnog tretmana. Svi pamučni čepovi se odrežu na nivou ivica epruvete, gurnu unutra 1-1,5 cm i napune rastopljenim parafinom da se podloga ne osuši. Inokulisane epruvete se inkubiraju u termostatu na 37°C za 3-4 sedmice. One epruvete sa podlogom na koje su materijali posejani omčom i utrljani u površinu agara postavljaju se okomito. Ako su usevi rađeni Pasteurom pipetom, epruvete se stavljaju u termostat u nagnutom položaju 2-3 dana, a zatim okomito. Usjevi se pregledavaju svakih 5-7 dana. Uklanjaju se sve epruvete sa ranim rastom strane mikroflore. U slučajevima ranog rasta karakterističnih kolonija (prije 5. dana) donosi se zaključak o prisutnosti brzorastućih mikobakterija, tj. negativan odgovor za tuberkulozu. Rast bakterija tuberkuloze najčešće se javlja nakon 3 sedmice, ali ima slučajeva i nakon 2-3 mjeseca. Na gustom mediju rastu hrapave, hrapave, suhe kolonije bez pigmenta, s naboranom površinom, zadebljanim središtem i tankim, neravnim rubovima. Po izgledu podsjećaju na kriške karfiola ili bradavice.To su tipične kolonije R oblika karakteristične za patogene sojeve. S-oblik žutih ili narančastih kolonija obično je karakterističan za druge vrste mikobakterija. Ali pod utjecajem antibakterijskih lijekova, M tuberkuloza također može formirati meke, vlažne, pigmentirane kolonije S-oblika. Potrebno je obratiti pažnju na brzinu i obilje rasta.Mnogo rjeđe se ispitivani materijal sije u glicerinsku juhu, tečne podloge sa krvnom plazmom, goveđi serum ili sintetičku Sotonovu podlogu. Na njima Mycobacterium tuberculosis raste nešto brže, ima izgled nježnog filma koji se s vremenom zgušnjava, grublja, postaje krhak i taloži. Tečne podloge se inokuliraju u epruvete sa čvrstom podlogom, čime se povećava broj pozitivnih rezultata, ali istraživanje traje duže.Da bi se povećala učestalost inokulacije uzročnika tuberkuloze, ispitivani materijal se tretira deterdžentima koji imaju baktericidno dejstvo na druga mikroflora (laurosept, natrijum laurisulfat, rodolan, teapol, cetavlon, itd.). Ovo poboljšava homogenizaciju materijala, eliminiše centrifugiranje i omogućava brži rast kolonija.

Ubrzane metode uzgoja

Da bi se rast Mycobacterium tuberculosis znatno brže postigao, predložene su metode mikrokulture Price i školaraca. Prajsova metoda uključuje širenje sputuma, gnoja, sedimenta mokraće, tečnosti za ispiranje i drugog materijala u debelom sloju na nekoliko uskih stakalca (obični stakalci su prepolovljeni po dužini). Osušeni razmazi se uzimaju sterilnom pincetom i uranjaju na 15-20 minuta u epruvete sa 2% rastvorom sumporne kiseline, a zatim se ispiru tri puta sterilnim rastvorom natrijum hlorida da bi se uklonila kiselina. Nakon toga, lijek se stavlja u epruvete ili bočice s tekućim Sotonovim podlogom ili citratom krvi. Razmaz mora biti potpuno prekriven hranljivim podlogom. Za suzbijanje strane mikroflore, koja ponekad može ostati nakon tretiranja razmaza kiselinom, u podlogu se dodaje 10 U/ml penicilina. Usjevi se uzgajaju u termostatu na 37-38°C. Nakon 3-4 dana, stakla sa mrljama se skidaju, fiksiraju suvom toplotom, boje se Ziehl-Neelsenom ili rodaminom i pregledaju mikroskopski. Virulentne mikrokulture u preparatima formiraju pramenove ili "skosy", koji nastaju pod uticajem faktora vrpce.Maksimalni rast mikrokultura se primećuje 7-10 dana Duboka kultivacija mikobakterija u hemolizovanoj krvi metodom Školjnikova se dobija inokulacijom materijal tretiran, kao i obično, sumpornom kiselinom i ispran sa 0,85% rastvorom natrijum hlorida.Nakon 6-8 dana kultivacije kultura se centrifugira, od sedimenta se prave razmazi, boje se Ziehl-Neelsen metodom ili fluorohromom i mikroskopski U preparatima se nalaze tipične mikrokulture sa karakterističnim rasporedom u vidu pletenica i užadi Za identifikaciju L-oblika Mycobacterium tuberculosis vrši se inokulacija materijala nakon odgovarajućeg tretmana kiselinom u posebnom polutečnom mediju, sipa se u epruvete u obliku kolone. Gaji se na 3-7°C 1-2 mjeseca.Rast L-forma podsjeća na oblak sa malim inkluzijama, koji su slični grizu.Pripremljeni razmazi se pregledavaju pod fazno-kontrastni mikroskop, uz pomoć kojeg se bolje otkrivaju G-oblici različite morfologije. mogu se otkriti i serijskim pasažama na zamorcima ili korištenjem imunofluorescentne metode korištenjem seruma koji sadrže obilježena antitijela protiv antigena oblika L. Mnogi znakovi se koriste za identifikaciju izoliranih kultura patogena tuberkuloze i njihovo razlikovanje od drugih tipova mikobakterija. Glavni su virulentnost, brzina rasta, oblik kolonije, formiranje pigmenta, katalaza, ureaza, nikotinamidaza, nitrat reduktaza. Najvažniji znak M tuberkuloze je niacinski test – sposobnost da se sintetiše značajna količina nikotinske kiseline (niacina). Aktivnost katalaze je relativno slaba i gubi se na 68 °C. Za brzu diferencijaciju uzročnika humane tuberkuloze preporučuje se inokulacija na Lowenstein-Jensen mediju sa 500 µg/ml i 1000 µg/ml salicilnog natrijuma. Mycobacterium tuberculosis ne raste na ovoj podlozi u takvim uslovima.Pitanje virulencije mikobakterija rešava se na osnovu bioloških uzoraka i detekcije kord faktora. Potonje se određuje metodom Price mikrokulture, kao i na osnovu jakog vezivanja boja poput neutralne crvene ili nilske plave. Kada se rastvor NaOH nanese na razmaz, bacili tuberkuloze zadržavaju boju boje, dok nevirulentne mikobakterije menjaju odgovarajuću boju.Za pouzdanu identifikaciju vrsta mikobakterija u savremenim uslovima razvijene su progresivne, brze i veoma precizne metode za određivanje u test materijalima kao što su sputum, pleuralna tečnost, likvor, gnoj, krvni serum, sadržaj želuca, tkiva, itd. Ovi predmeti, dezinfikovani zagrevanjem, čuvaju se na neodređeno vreme i mogu se pregledati u bilo kom trenutku. Među njima najviše pažnje zaslužuje molekularno genetska metoda polimerazne lančane reakcije. Zasniva se na detekciji mikobakterijske DNK u biološkom materijalu. Čak i ako materijal sadrži samo 5-10 mikrobnih ćelija, pomoću oligonukleotidnih prajmera, u ciklotermostatu se pokreće sinteza specifičnih DNK fragmenata, koji se zatim mogu identifikovati gel elektroforezom. Rezultati istraživanja se dobijaju za 3-4 sata Specifični antigeni u istim materijalima se mogu brzo detektovati pomoću enzimskog imunosorbentnog testa, ako imate odgovarajuća antitela adsorbovana na čvrstoj fazi u polistirenskim tabletama.

Određivanje rezistencije mikobakterija na hemoterapijske lijekove

Rezistencija uzročnika tuberkuloze na lijekove utvrđuje se metodom serijskih razblaženja prije tretmana, nakon 3 mjeseca, a naknadno uz kontinuiranu izolaciju bacila tuberkuloze svakih 6 mjeseci. To se postiže uzgojem kultura na podlogama sa različitim koncentracijama tuberkulostatika.Rezistencija mikobakterija se može odrediti na dva načina: direktan i indirektan. U direktnoj metodi, odgovarajuće tretirani materijal se direktno sije na podloge s različitim koncentracijama antibiotika ili drugih lijekova za kemoterapiju. Djelotvoran je, ali se može koristiti samo kada se u materijalu otkrije najmanje 5 mikobakterija u svakom vidnom polju. Indirektnom metodom, prethodno izolovane kulture mikobakterija se sije na podlogu sa antituberkuloznim lijekovima. U oba slučaja potrebna je kontrola - inokulacija na istoj podlozi bez tuberkulostatika.U savremenim uslovima najčešće metode za određivanje rezistencije mikobakterija na lek su: 1) kultivacija na gustom Levenpgein-Jensen medijumu 2) mikrokultura na Price čaše 3) dubinska inokulacija u polusintetičkoj sredini Suspenzija izolovane kulture (500 miliona mikrobnih tijela u 1 ml) inokulira se u epruvete koje sadrže različite koncentracije lijekova i u jednu kontrolnu epruvetu (bez tuberkulostatika). Kultura se smatra osjetljivom ako je u epruveti s lijekom izraslo manje od 20 kolonija, uz obilan rast u kontroli. Ako je naraslo više od 20 kolonija, kultura se smatra stabilnom. Rezistencija datog soja izražava se maksimalnom koncentracijom antibakterijskog lijeka pri kojoj još uvijek dolazi do rasta, bliskom onoj u kontroli.

Biološka metoda

Biološka metoda za dijagnosticiranje tuberkuloze - infekcije zamoraca - je osjetljiva. Infektivna doza patogena za ove životinje je samo nekoliko bakterijskih stanica. Ispitni materijal se tretira sa 2% rastvorom sumporne kiseline 20 minuta, uključujući centrifugiranje. Zatim se sediment tri puta ispere sa 0,85% rastvorom natrijum hlorida i emulguje u 1-2 ml izotonične otopine. Emulgirani sediment se ubrizgava supkutano u područje prepona dva zamorca težine 250-300 g uz negativni Mantoux test. Ako je količina materijala mala, ubrizgava se u trbušnu šupljinu ili parenhim testisa. Ova metoda infekcije povećava osjetljivost biotesta, posebno u slučajevima kada materijal sadrži niskovirulentne bacile tuberkuloze koji su rezistentni na izoniazid i druge lijekove za kemoterapiju.Nakon 2-3 sedmice zaražene životinje se vagaju, veličine uvećane određuju se limfni čvorovi i radi se Mantoux test koji se ponavlja nakon 6 sedmica Lokalne patološke promjene i smanjenje tjelesne težine predstavljaju osnovu za otvaranje zamorčića i pregled njihovih unutrašnjih organa. Ako su rezultati negativni, životinje se ubijaju nakon 3-4 mjeseca, histološki se pregledaju parenhimski organi i rade kulture na selektivnim podlogama.Zamorci se koriste i za otkrivanje L-oblika mikobakterije tuberkuloze. U takvim slučajevima potrebno je izvršiti nekoliko uzastopnih infekcija, jer L-oblici imaju manju virulentnost i izazivaju benigni tok tuberkuloze kod životinja, a sa reverzijom L-oblici mogu postati generalizirani proces.Nedavno je bio test na bijelim miševima sve više se koriste, inficirajući ih intracerebralno. Biološki testovi na laboratorijskim životinjama svojevrsni su “zlatni standard” za dijagnosticiranje tuberkuloze.

Serološka dijagnoza

Za otkrivanje anti-tuberkuloznih antitijela, inicijalno su predložene reakcije aglutinacije, precipitacije i fiksacije komplementa. Sada se retko koriste. Ali počeli su naširoko prakticirati reakciju indirektne hemaglutinacije. Koristi senzibilizirane ovčje ili ljudske eritrocite O-grupe kao antigen. pune su ekstrakta iz bakterija tuberkuloze ili pročišćenog tuberkulina. 20 ml mikobakterijskog ekstrakta doda se u 1 ml sedimenta eritrocita, drži na 37°C 2 sata i ispere centrifugiranjem da bi se uklonio višak antigena. Prije izvođenja RNGA, pacijentov serum se iscrpljuje crvenim krvnim zrncima kako bi se eliminirala nespecifična reakcija. Zatim se serum razblaži od 1:2 do 1:272. Dijagnostičkim titrom smatra se razrjeđenje 1:8. Kod tuberkuloze RNGA je pozitivna u 70-90% slučajeva.Dobre rezultate daju i enzimski imunotest, imunobloting i hemaglutinacijske agregatne reakcije za određivanje cirkulirajućih imunoloških kompleksa. Još preciznije, postoji radioimuna metoda, ali zbog visoke cijene dijagnostike i nedostatka radiometrijske opreme, rijetko se koristi u medicinskim ustanovama.Za poboljšanje serološke dijagnostike tuberkuloze važno je uspostaviti proizvodnju monoklonskih antitijela na razne mikobakterijske antigene. Uz njihovu pomoć bilo bi moguće identificirati specifične epitope bakterija, kao i odgovarajuća antitijela. Detekcija takvih antitijela imat će važnu dijagnostičku vrijednost.

Alergijska metoda

Tuberkulinski intradermalni Mantoux test je specifičan dijagnostički test. Koristi se za određivanje stope zaraženosti populacije tuberkulozom, masovni skrining djece i adolescenata na tuberkulozu, odabir osoba kojima je potrebna revakcinacija, provjeru njene efikasnosti, kao i u svrhu dijagnosticiranja tuberkuloze i utvrđivanja aktivnosti procesa. Tuberkulin se koristi za testiranje. Godine 1890. Robert Koch je predložio prvi lijek, takozvani stari Koch tuberkulin (Alttuberkulin Koch ili ATK). Pravi se od mješavine ljudskih i goveđih mikobakterijskih kultura koje se uzgajaju u glicerinskom bujonu 5-6 sedmica. Kultura se sterilizira tekućom parom 30 min, ispari na 70°C do 110 prvobitne zapremine, filtrira kroz bakterijski filter i sipa u ampule. Kochov tuberkulin sadrži brojne balastne supstance i teško ga je standardizirati. Počevši od 1934. godine, Seibert je predložio visoko prečišćeni tuberkulinski preparat, koji se zvao PPD-S (Purified protein derivative - Seibert), za izvođenje testova na alergije. Nakon 5 godina M.A. Linnikov je proizveo pročišćeni tuberkulin nazvan PPD-L. Dozira se u tuberkulinskim jedinicama (TU). 1 TO sadrži 0,00006 mg suhe droge. PPD-L se proizvodi u dva oblika: suhi prečišćeni tuberkulin u ampulama od 50.000 TO i PPD-L u standardnom razblaženju u ampulama od 3 ml. 0,1 ml rastvora sadrži jednu dozu (2 TU) Lijek se primenjuje intradermalno sa tuberkulinskim špricem od jednog grama u zapremini od 0,1 ml u srednju trećinu podlaktice. Pre ubrizgavanja, koža se obriše sa 70% alkohola. U površinski sloj kože pod uglom od 15° u odnosu na površinu uvlači se tanka igla, izrezana prema gore.Rezultati alergijskog testa se procjenjuju nakon 72 sata prema sljedećoj shemi: negativan test - potpuno odsustvo papule ; sumnjivo - papula veličine 2-4 mm ili samo hiperemija bilo koje veličine; pozitivna - papula promjera 5 mm ili više; hiperergična - u djece i adolescenata papula promjera 17 mm ili više, kod odraslih - 21 mm ili više.

Prevencija i liječenje

Za specifičnu prevenciju koristi se živa BCG vakcina (Bacille Calmette-Guerin). BCG soj su odabrali A. Calmette i C. Guerin dugotrajnim pasiranjem goveđe tuberkulozne bakterije (M.bovis) na podlogu od krompira i glicerola uz dodatak žuči. Napravili su 230 subkultura tokom 13 godina i izolovali mutanta sa smanjenom virulentnošću. U našoj zemlji sva novorođenčad se vakcinišu protiv tuberkuloze 5-7 dana života. Revakcinacija se sprovodi za osobe sa negativnim tuberkulinskim testom u intervalima od 5-7 godina do 30. godine života. Ovo stvara infektivni imunitet sa preosjetljivošću odgođenog tipa. Za liječenje tuberkuloze koriste se antibiotici i lijekovi za kemoterapiju, na koje su patogeni osjetljivi. To su lijekovi prve linije: dehidrostreptomicin, PAS i GINK (hidrazidi izonikotinske kiseline - izoniazid, tubazid, ftivazid) i lijekovi druge linije: etionamid, cikloserin, kanamicin itd. Zbog trenutnog širenja rezistentnih sojeva myco tuberculous , Međunarodna unija protiv tuberkuloze predložila je novu klasifikaciju lijekova protiv tuberkuloze: I serija - najefikasniji (izoniazid i rifampicin), II serija - lijekovi prosječne efikasnosti (etambutol, streptomicin, etionamid, pirazinamid, kanamicin, cikloserin), III serija - manji lijekovi protiv tuberkuloze (PAS i Tibon). Kompleks terapijskih mjera koristi desenzibilizirajuću terapiju i stimulaciju prirodnih odbrambenih mehanizama organizma.