Dvojstupňový útes mikrobiológie. Mechanizmus, účel uplatnenia imunofluorescenčnej reakcie (útes), typy útesov, zložiek

Imunofluorescenčná metóda (Reef, imunofluorescenčná reakcia, KUNS Reakcia) - Spôsob detekcie špecifických AGS s použitím konjugovaných s fluórochromómom. Má vysokú citlivosť a špecificitu.

Používa sa na rýchlu diagnostiku infekčné choroby (Identifikácia patogénu v štúdii podľa materiálu), ako aj na stanovenie receptorov na a povrchové receptory a markery leukocytov (imunophenotypizácia) a iné bunky.

Detekcia bakteriálnych a vírusových antigénov v infekčných materiáloch, tkanivách zvierat a kultúr buniek s pomocou fluorescenčných protilátok (séra) získané rozšírené použitie v diagnostickej praxi. Príprava fluorescenčných sérov je založená na schopnosti niektorých fluorochrómov (napríklad izotiokyanát fluoresceínu) spojiť chemickú väzbu so sérovými proteínmi bez porušenia ich imunologickej špecificity.

Existujú tri odrody metódy: rovné, nepriame, s doplnkom. Metóda priameho útesu je založená na skutočnosti, že antigény tkanív alebo mikróbov liečených imunitnými sérami s protilátkami označenými fluorochromasami sú schopné žiariace v UV žiarení fluorescenčného mikroskopu. Baktérie v nátere ošetrené takýmto luminiscenčným sérom žiariaci pozdĺž obvodu buniek vo forme hranicu zelenej.

Metóda nepriamych útesov je identifikácia antigén komplexu - protilátky s použitím anti-globulínu (anti-protilátky) s srvátkou označenou fluorochromom. Na tento účel sa zdvihy z suspenzie mikróbov liečia antimikrobiálnymi rabbitovými diagnostickými sérovými protilátkami. Potom protilátky, ktoré nie sú v rozpore s mikrobiálnymi antigénmi, sa premyjú a protilátky zostávajúce na mikróboch odhaľujú, ošetrujú séru anti-globulínu (anti-cyklovanie) s fluórochromasami. Výsledkom je, že komplex mikróbu je vytvorený + antimikrobiálne králičie protilátky + protilátky proti cyklistike označené fluórochromómom. Tento komplex je pozorovaný v luminiscenčnom mikroskope, ako aj priamym spôsobom.

Mechanizmus. Zdvih z testovaného materiálu sa pripraví na predmetnom skle, upevnené na plameň a je liečený imunitným králičím sérom obsahujúcim protilátky proti antigénom kauzálnych činidiel. Na vytvorenie komplexu antigénu-protilátky sa liečivo umiestni do mokrej komory a inkubuje sa pri 37 ° C počas 15 minút, potom sa dôkladne premyje izotonickým roztokom chloridu sodného, \u200b\u200baby sa odstránili protilátky, ktoré nie sú pripojené k antigénu . Potom sa liečivo aplikuje s fluorescenčným anti-globulínovým sérom proti rabbitovým globulínom, udržiavaným počas 15 minút pri 37 ° C a potom sa liek dôkladne premyje izotonickým roztokom chloridu sodného. V dôsledku väzbového fluorescenčného antihygrobulínového séra s antigénom fixovaným antigénom sú vytvorené žiariace antigénové komplexy, ktoré sa nachádzajú v svetelnej mikroskopii.

22. Prepojený imunosorbent test - laboratórna imunologická metóda vysokej kvality alebo kvantitatívne stanovenie Rôzne zlúčeniny, makromolekuly, vírusy atď., Vztiahnuté na špecifickú reakciu antigénovej protilátky. Identifikácia výsledného komplexu sa uskutočňuje s použitím enzýmu ako štítok na registráciu signálu.

Klasifikácia:

Konkurencieschopné (v systéme súčasne existuje analyzovaná zlúčenina a jeho analóg)

Nekonkurenčné (ak je v systéme prítomná iba analyzovaná zlúčenina a zodpovedajúce väzbové centrá (antigén a špecifické protilátky))

Priame a nepriame

1. Dostupné obsahujúce zmes AT sa inkubuje s AG upevneným na pevnom substráte.

2.At, ktorý neviaže AG, sa odstránia viacnásobným umývaním.

3. Zadajte antiserizmus označený enzýmom na, viazanie

4. Určil počet enzýmových marker spojených s

Nepriame:

Na-pozitívnym sérom

1.Špecifické pri rozhodcovom sére sa viažu na hypertenziu, upevnené na pevnom substráte

2. Špecifický na, označený enzýmom, neintekturajte s pridruženým obsahom AG v značke v podklade

Negatívne sérum

1. Nešpecifické v testovacom sére NEPOUŽÍVAJTE AG, upevnené na pevnom substráte

2. Špecifické na, označené enzýmom, interakciou, s pevným AG-južným markerom

Najbežnejšou pevnou fázou IFA, v ktorej je jedna zo zložiek imunitnej reakcie (antigén alebo protilátka) sornote na pevnom nosiči. Ako pevné médium sa používajú polystyrénové mikropány. Pri určovaní protilátok v jamkách s sorbovaným antigénom sa postupne pridáva sérum značené enzýmom a zmes roztokov pre enzým a chromogén. Zakaždým po pridaní ďalšieho komponentu z otvorov odstráňte neviazané reagencie dôkladným praním. S pozitívnym výsledkom sa zmena chromogénového roztoku zmien.

Nosič tuhej fázy môže byť senzibilizovaný nielen antigénom, ale aj protilátkou. Potom sa intektívny antigén zavádza do jamiek s sorbedovými protilátkami, proti antigénu, ktorý je označený enzýmom a potom zmes substrátových roztokov na enzým a chromogén.

Aplikácia:diagnostikovať ochorenia spôsobené vírusovými a bakteriálnymi kapustajúcimi činidlami.

23. Sérologická reakcia - reakcia, ktorou sa skúma antigénová reakcia (mikrobiálny, vírus, cudzinecký proteín) so sérovými protilátkami.

Sérologické štúdie - Toto sú spôsoby štúdia určitých protilátok alebo antigénov u pacientov s krvným sérom založenými na reakciách imunity. S ich pomocou sa odhaľujú antigény mikróbov alebo tkanív, ktoré ich identifikujú.

Detekcia v sére pacienta protilátky proti pôvodcovi infekcie alebo zodpovedajúcim antigénom vám umožní vytvoriť príčinu ochorenia.

Sérologické štúdie sa tiež používajú na stanovenie antigénov krvných skupín, tkanivových antigénov a humorálnej úrovne imunity.

Sérologické štúdie zahŕňajú rôzne sérologické reakcie:

1. Reakcia aglutinácie.

2. Zrážacia reakcia.

3. Neutralizačná reakcia.

4. Reakcia zahŕňajúca komplement.

5. Reakcia s použitím značených protilátok alebo antigénov.

Laboratórna diagnostika používa niekoľko testov syfilis naraz, aby sa dosiahol najpresnejší výsledok. Trvá to viac času, ale dáva najpresnejšiu odpoveď.

Najčastejšie je výsledok analýzy útesu očíslovaný. Dekódovanie má nasledujúci notácia:

prudko pozitívny výsledok je označený o 4 plusy (++++);
pozitívny výsledok je označený 3 plusy (+++);
slabo pozitívny výsledok 2 plusy (++);
pochybný výsledok 1 plus (+);
negatívny výsledok sa označuje 1 mínus (-).

Výsledok útesu na Syfilis je tiež predložený ako percento, ktorá závisí od kvantitatívneho ukazovateľa viazaných baktérií: \\ t

s negatívnym výsledkom imobilizácia až 20%;
so slabo zemným výsledkom sa imobilizácia líši od 20 do 50%;
s pozitívnym výsledkom je imobilizácia nad 50%.

Ak výsledok vydal pozitívny Odpoveď, uvádza prítomnosť ochorenia.

Ak výsledok slabýTo označuje jednotné množstvo reziduálnych protilátok v krvi.

Negatívny Výsledok ukazuje absenciu bledého treponamu, čo znamená, že pacient je zdravý.

Skúsení lekári našej kliniky rýchlo diagnostikujú syfilis rýchlo a s vysokou presnosťou čítania. Sme sociálne zameraní na všetky segmenty obyvateľstva, tak analýza útesu stojí lacný. Cena je prezentovaná v tabuľke na našich webových stránkach.

Používa sa na rýchlu diagnózu infekčných ochorení (identifikácia patogénu v študijnom materiáli), ako aj na stanovenie receptorov AT a povrchových receptorov a leukocytových markerov (imunophenotypizácia) a iných buniek.

Mechanizmus. Zdvih z testovaného materiálu sa pripraví na predmetnom skle, upevnené na plameň a je liečený imunitným králičím sérom obsahujúcim protilátky proti antigénom kauzálnych činidiel. Na vytvorenie komplexu antigénu-protilátky sa liečivo umiestni do mokrej komory a inkubuje sa pri 37 ° C počas 15 minút, potom sa dôkladne premyje izotonickým roztokom chloridu sodného, \u200b\u200baby sa odstránili protilátky, ktoré nie sú pripojené k antigénu . Potom sa liečivo aplikuje s fluorescenčným anti-globulínovým sérom proti rabbitovým globulínom, udržiavaným počas 15 minút pri 37 ° C a potom sa liek dôkladne premyje izotonickým roztokom chloridu sodného. V dôsledku väzbového fluorescenčného anti-globulínového séra s antigénom fixovaným antigénom, antigén - protilátka, ktoré sa nachádzajú v žiarivkovom mikroskopii.

4. Vo vzduchu detskej spálne, 75 MT / m3 Streptococcus, 12 MT / M3 Staphylococcal a 1 MT / M3 tuberkulózy baktérie. Poskytnúť sanitárne a bakteriologické hodnotenie vzduchu a načrtnúť svojský plán sanitácie.

Číslo skúšky Číslo _54

Retrovírusy. HIV infekcia (AIDS) a jeho patogény.

Vírus ľudskej imunodeficiencie spôsobuje infekciu HIV vytvorením vývoja syndrómu získaného imunitného deficitu.

Prívotnom činidle HIV infekcie je lymfotropný vírus, ktorý patrí do rodiny Retroviridae rinom lentivírusom.

Morfologické vlastnosti: vírus obsahujúci RNA. Vírusová častica sférického tvaru plášťa pozostáva z dvojitej vrstvy lipidov preniknutých glykoproteínov. Lipidová škrupina pochádza z plazmatickej membrány hostiteľskej bunky, v ktorej je vírus reprodukovaný. Molekula glykoproteínov sa skladá z 2 podjednotiek umiestnených na povrchu viriónu a preniknutím jeho lipidovej škrupiny.

Jadro kužeľového vírusu, pozostáva z kapsidových proteínov, radu matricových proteínov a proteínov proteáz. Gén tvorí dve RNA nite, na implementáciu procesu reprodukcie, HIV má reverznú transkriptázu alebo zvrátiť.

Vírusový gén pozostáva z 3 hlavných štruktúrnych génov a 7 regulačných a funkčných génov. Funkčné gény vykonávajú regulačné funkcie a zabezpečujú implementáciu reprodukčných procesov a účasť vírusu v infekčnom procese.

Vírus ovplyvňuje hlavne T- a B-lymfocyty, niektoré monocytové bunky (makrofágy, leukocyty), bunky nervovej bunky.

Kultúrne nehnuteľnosti: Na kultúru buniek T-lymfocytov a ľudských monocytov (v prítomnosti IL-2).

Antigénna štruktúra: 2 typy vírusov - HIV-1 a HIV-2 HIV-1, má viac ako 10 genotypov (podtypov): A, B, C, D, E, F ..., sa líšia medzi sebou na aminokyseline Zloženie proteínov.

HIV-1 je rozdelený do 3 skupín: M, N, O. Väčšina izolátov patrí do skupiny M, v ktorom sa rozlišuje 10 podtypov: A, B, C, D, FL, F-2, G, N, I, K. Stabilita: Je citlivá na fyzikálne a chemické faktory, zomrie v prípade zahrievania. Vírus sa môže naďalej udržiavať v sušenom stave v sušenej krvi.

Faktory patogenite, patogenézy: Vírus je pripojený k lymfocytu, preniká do bunky a reprodukuje v lymfocyte. V dôsledku chovu HIV v lymfocyte sa tieto sú zničené alebo stratia svoje funkčné vlastnosti. V dôsledku chovu vírusu v rôznych bunkách sa akumuluje v orgánoch a tkanivách a nachádza sa v krvi, lymfy, sline, moči, pot, skrývacích masy.

V HIV infekcii sa zníži počet T-4-lymfocytov, funkcia B-lymfocytov je narušená, funkcia prírodných vrahov je potlačená a reakcia na antigény klesá a produkty komplementu, lymfokinovov a iných faktorov regulujúcich imunitný Funkcie (IL) sú znížené, čo vedie k systémom imunitných dysfunkcií.

Klinika: Umasted dýchací systém (pneumónia, bronchitída); CNS (abscesy, meningitída); Gastrointestinálny trakt (hnačka), malígne neoplazmy vznikajú (vnútorné organy nádory).

Infekcia HIV pokračuje v niekoľkých štádiách: 1) inkubačná dobav priemere 2-4 týždne; 2) etapa primárne prejavycharakterizované prvou akútnou horúčkou, hnačkou; Štádium asymptomatickej fázy a pretrvávanie vírusu, obnovenie pohodu, je určená, ale HIV protilátky, 3) sú stanovené v krvi, fáze sekundárnych ochorení, ktoré sa prejavujú respiračnou léziou, nervóznym systém. HIV infekcia je horšia, 4. terminálový stupeň AIDS.

Mikrobiologická diagnostika.

Virologické a sérologické štúdie zahŕňajú spôsoby stanovenia antigénov a HIV protilátok. Pre toto použitie ELISA, IB a PCR. Sérum pacientov s HIV-1 a HIV-2 obsahujú protilátky na všetky vírusové proteíny. Avšak, protilátky proti proteínom GP41, GPL20, GPL60, p24 v HIV-1 a protilátok sú určené na potvrdenie diagnózy, GP36, GPL05, GPL40 v proteínoch HIV-2. HIV protilátky sa objavujú v 2-4 týždňoch po infekcii a sú určené vo všetkých stupňoch HIV.

Spôsob identifikácie vírusu v krvi, lymfocytoch. Avšak, s akoukoľvek pozitívnou vzorkou, IB reakcia je nastavená na potvrdenie výsledkov. PCR sa tiež používa schopný identifikovať infekciu HIV v inkubácii a predčasnom klinickom období, ale jeho citlivosť je o niečo nižšia ako ELISA.

Klinické a sérologické diagnózy sú potvrdené imunologickými štúdiami, ak uvádzajú prítomnosť imunodeficiencie v prieskume pacienta.

Diagnostický testovací systém na stanovenie protilátok proti HIV zahŕňa vírusovú AGA, adsorbovaná na nosiči, ATI proti Ig. Používa na serodiagnostiku pomoc.

Liečba: Použitie inhibítorov reverznej transkriptázy pracujúceho v aktivovaných bunkách. Prípravky sú tremidínové deriváty - azidothimidín a fosfazid.

Prevencia. ŠPECIFICKÉ - NO.

Vplyv fyzikálnych a chemických faktorov na mikróby. Mutácia a jeho hodnota pre praktickú medicínu. Príklady. Hodnota ekológie.

Účinok chemických a biologických faktorov.

Činnosť chemikálií

Chemikálie môžu spomaliť alebo úplne potlačiť rast mikroorganizmov. Ak chemická látka potláča rast baktérií, ale po odstránení sa ich rast opäť obnoví.

Antimikrobiálne látky, s prihliadnutím na chemickú štruktúru a mechanizmus ich baktericídnej účinky na baktérie, môžu byť rozdelené do nasledujúcich skupín: oxidačné činidlá, halogény, zlúčeniny kovov, kyselín, a alkalické, povrchovo aktívne látky, alkoholy, farbivá, fenolové deriváty a formaldehyd.

Oxidifikátory. Táto skupina zahŕňa peroxid vodíka a manganistan draselný.

Halogény. Chlór, jód a ich liečivá: chlórové vápno, chlór, panticid, jódový alkoholový roztok 5%, jódinol, jódtoform.

Zlúčeniny ťažkých kovov (soľ olova, meď, zinok, striebro, ortuť; strieborné kovové spojenia: potirgol, gollargol). Tieto zlúčeniny sú schopné poskytovať antimikrobiálne aj špinavé lokálne pôsobenie na tkaninu makroorganizmov.

Kyseliny a alkálie. Baktericídny účinok kyselín a alkálie sú dehydratácia mikroorganizmov, zmena pH živného média, hydrolýzu koloidných systémov a tvorbu kyslých alebo alkalických albumov.

Farbivá majú vlastnosti oneskoriť rast baktérií. Pôsobia pomaly, ale selektívnejšie.

Formaldehyd-bezfarebný plyn. V praxi sa používa 40% vodný roztok formaldehydu (formalín). Plynné a rozpustené vo vode formaldehyd deštruktívne ovplyvňuje vegetatívne a spory tvarov baktérií.

Účinok biologických faktorov

Účinok biologických faktorov je predovšetkým v antagonizme mikróbov, keď výrobky vitálnej aktivity niektorých mikróbov určujú smrť druhých.

Antibiotiká (z gréckeho. Anti-anti-bios - život) - biologicky účinné látky vytvorené počas života húb, baktérií, zvierat, rastlín a vytvorených syntetickými, schopnými selektívne potlačiť a zabiť mikroorganizmy, huby, rickettsia, veľké vírusy, najjednoduchšie a samostatné helmints.

3. Reakcia biologickej aktivity bakteriálnych enzýmov počas reumatizmu, diagnostického a praktického významu, ochranná úloha protilátok proti enzýmom v získanej imunite (definícia antihialuromanonidázy a anti-streptolisínu).

Reuma - všeobecné ochorenie Infekčný-alergický charakter, v ktorom je ohromený spojivové tkanivo, hlavne kardio-vaskulárneho systémuRovnako ako kĺby, \\ t vnútorné orgány, Central nervový systém. Predpokladá sa, že príčinou vývoja reumatizmu je aktivácia patogénnych mikroorganizmov, najmä beta-hemolytickej streptokokovej skupiny A. Je to jeho hlavná úloha v etiológii a patogenéze reumatických ochorení. Po prvé, choroba sa vyvíja na pozadí streptocokcálna infekcia. Po druhé, v krvi pacientov je veľký počet protilátok proti mikroorganizmom tejto skupiny. Po tretie, prevencia ochorenia sa úspešne uskutočňuje antibakteriálnymi liekmi.

S reumatoidnou artritídou, synoviálnymi membránami, zbližovanými dôvodmi, vylučujú veľké množstvo enzýmovej glukózy-6-fosfátdehydrogenázy, ktorá tiež ničí disulfidové väzby v bunkovej membráne. V tomto prípade existuje "únik" proteolytických enzýmov z bunkových lyzozómov, čo spôsobuje poškodenie blízkych kostí a chrupavky. Telo na to reaguje tým, že produkuje cytokíny, medzi ktorými existuje aj faktor nekrózy nádoru a TNF-a. Kaskády reakcií v bunkách, ktoré sa spúšťajú cytokíny, ďalej zhoršujú symptómy ochorenia. Chronický reumatoidný zápal spojený s TNF-α, veľmi často spôsobuje poškodenie chrupavky a kĺbov, ktoré vedú k fyzickému postihnutiu.

Imunofluorescenčná reakcia (Reef) je sérologická reakcia, ktorá vám umožní identifikovať protilátky na známe antigény. Metóda leží v mikroskopii maľovaných náterov.

Táto reakcia sa používa v imunológii, virológii a mikrobiológii. To vám umožní určiť prítomnosť vírusov, baktérií, huby, najjednoduchších a ICC. Reef je veľmi široko používaný v diagnostickej praxi na detekciu vírusových a bakteriálnych antigénov v infekčnom materiáli. Spôsob je založený na schopnosti fluorochrómu komunikovať s proteínmi bez rušenia ich imunologickej špecificity. Používa sa hlavne pri diagnostike infekcií močových ciest.

Rozlišujú sa nasledujúce spôsoby imunofluorescenčnej reakcie: priame, nepriame, s komplementom. Priama metóda pozostáva z farbenia materiálu fluorochromasami. Vďaka schopnosti mikróbov alebo tkanivových antigénov alebo tkaniva v UV-ray luminiscenčného mikroskopu sú definované ako bunky s pestrofarebnou farbou hranice.

Nepriame spôsob je určenie komplexu antigénu + protilátky. Experimentálny materiál je na to liečený antimikrobiálnymi králičinami protilátkami určenými na diagnózu. Po kontakte s mikróbmi protilátok sú oddelené od nekotykovaných a ošetrených protirakovinovým sérom označeným fluórochromami. Potom sa komplex mikrobky + animicrobiálne protilátky + antiky a protilátky určujú s použitím ultrafialového mikroskopu, ako aj s priamym spôsobom.

Imunofluorescenčná reakcia je nevyhnutná pri diagnostike syfilisu. Pod vplyvom fluorochrómu je syfilis kauzačný činidlo definované ako bunka so žltohodnotou. Absencia žiara znamená, že pacient nie je infikovaný syfilisom. Táto analýza je často predpísaná pozitívnou reakciou Wassermana. Táto metóda je veľmi účinná pri diagnostikovaní, pretože umožňuje určiť patogén skoré štádia Choroby.

Okrem toho, útes vám umožňuje diagnostikovať syfilis, to je tiež použitý na stanovenie prítomnosti takýchto patogénov ako chlamýdie, mykoplasma, trichomonas, ako aj kauzálnych činidiel kvapaliny a genitálneho herpesu.

Na analýzu sa používajú ťahy alebo venózna krv. Postup pri prijímaní makalu je úplne bezbolestný a žiadne nebezpečenstvo. Na dodanie tejto analýzy musí byť pripravená. Dvanásť hodín pred ním sa neodporúča používať hygienické nástroje, ako napríklad malé alebo gély. Niekedy, podľa svedectva lekára, vykonáva sa provokácia. Na tento účel sa odporúča prijímať akútne potraviny alebo alkohol alebo sa uskutočňuje injekcia provokujúcej látky, ako je napríklad goganovakcision alebo pyrogeal. Okrem toho musí byť najmenej štrnásť dní medzi prijímaním antibakteriálnych liekov a odovzdaním analýzy.

Pri hodnotení výsledkov by sa malo zvážiť skutočnosť, že žiara je pozorovaná nielen v živých baktériách, ale aj mŕtvych, to platí najmä pre Chlamydia. Po priebehu antibiotík, Mŕtve chlamydia bunky majú tiež žiaru.

So vhodnou prípravou pacienta a dodržiavania Stroje, táto analýza umožňuje identifikovať choroby v skorých štádiách, čo je veľmi dôležité pre včasnú liečbu. Pozitívne aspekty tejto metódy sú krátke obdobie získania výsledku, jednoduchosť vykonávania a malých nákladov na analýzu.

Nevýhody zahŕňajú skutočnosť, že pre analýzu je potrebné mať dostatočne veľké množstvo podľa štúdia. Okrem toho je možné vyhodnotiť len skúsený špecialista.

Prvýkrát, Coombs bol navrhnutý v roku 1942. Reef je založený na detekcii antigénov v klinickom materiáli, krvinkách a iných liekoch s monoklonálnymi protilátkami alebo sérovými značenými fluorochromami (priamy útes). Prvé (diagnostické) protilátky môžu byť detegované anti-imoglobulínovým sérom označeným fluorochromasami (nepriamy útes). Existujú modifikácie reeŠu na detekciu protilátok proti infekčným činidlám séra alebo sérové \u200b\u200bprotilátky.

Popularita útesu je vysvetlená nákladovou efektívnosťou. Široké spektrum Diagnostické súpravy, rýchlosť potvrdenia. Dnes sa táto reakcia používa polyklonálne sérum a monoklonálne protilátky, označené fluorescénom izotiokyanát (FITC). Aby sme znížili nešpecifické opustenie pozadia, používame spracovanie liekov hovädzím sérovým albumínom, ktorý je označený rhodamine alebo modrými Evans.

Najčastejšie sa útes používa na rýchly detekciu patogénu v patologickom materiáli. V tomto prípade sa zdvihne na predmetnom skle pripravia z materiálu podľa štúdie, pokiaľ ide o konvenčnú mikroskopiu. Liek je fixovaný metylalkoholom, acetónom alebo iným chemickým držiakom. Pohybové sérové \u200b\u200bphytz alebo monoklonálne protilátky sa aplikujú na povrch pevného náteru (v prípade nepriameho útesu, liečivo sa najprv ošetruje sérom oproti požadovaným antigénom a potom sa značí protilátky proti imunoglobulínom používaným v prvom stupni). Keďže útes je typom heterogénnej analýzy, jedna etapa je oddelená od iného prania.

Účtovníctvo pre výsledky reakcie sa uskutočňuje s použitím luminiscenčného mikroskopu, k optickému systému, ktorého je nainštalovaná sada svetelných filtrov, čo poskytuje osvetlenie lieku ultrafialovým alebo modrým fialovým svetlom s danou dlhou vlnou. Výskumník hodnotí charakter žiary, formy, veľkosti objektov a ich vzájomného umiestnenia.

Pri nastavení reeše na detekciu protilátok sa pripravia ťahy z referenčného kmeňa patogénu. Testové sérum sa aplikuje na rozmazanie. Ak predstavuje požadované protilátky, viažu sa na antigény mikrobiálnych buniek. Premývanie liečiva s tlmivým roztokom vám umožňuje odstrániť nesúvisiace protilátky. Prípravok sa potom spracuje s označeným sérom proti ľudským imunoglobulínom. Kedy pozitívny výsledok Reakcie s mikroskopickými škvrnami v luminiscenčnom mikroskope sú pozorované so špecifickou žiarením referenčnej kultúry.

Hlavnou nevýhodou útesu je jeho subjektivita.

Klasické kritériá pre špecifickosť tejto reakcie sú:

· Charakteristická morfológia, veľkosti a umiestnenie patogénu v rozmazaní;

· Periférna povaha luminiscencie objektu;

· Fluorescenčná farba;

· Intenzita fluorescencie.

V štúdii veľkých predmetov (Trichomonas, ľudské bunky, bunky postihnuté baktériami alebo vírusmi) vám umožnia získať spoľahlivý výsledok. Zároveň majú základné príbehy Chlamydia a Mycoplasma rozmery ležiace na limit rozlíšenia fluorescenčného mikroskopu. V tomto prípade je ťažké posúdenie morfológie mikroorganizmov je ťažké a žiara stráca periférny charakter. Zostávajúce kritériá zjavne nestačia na presvedčenú identifikáciu pozorovaného mikroorganizmu. V súvislosti s vyššie uvedeným, subjektívna povaha reakčného účtovníctva špeciálne požiadavky na personálne kvalifikácie vodivé.

2.2. Fluorescenčná imunoanalýza s dočasným rozlíšením (FIA BP, ETKINS R. ET WALLAC O., 1984)

Tento typ FIA je založený na princípoch sorpcie jednej z činidiel na pevnú fázu a používanie sendvičovej technológie, t.j. Dvojité uznanie, ako typfoid. Dôležitým rozdielom spôsobu je však použitie lantanidu chelátu ako štítok (prvky vzácnych zemín Európy, Samária, Terbium a Disrosion). Výhody FIA BP sú vysokou citlivosťou, technológiou formulácie, takou ELISA a potenciál významného zisku priaznivého signálu v dôsledku veľmi vysokého pomeru signálu k šumu. Špecifický fluorescenčný fluorescenci fluorescenčný štítok je nesmierne silnejší a dlhší ako fluorescencia pozadia. Okrem toho má štítok schopnosť obnoviť schopnosť luminiscencie (pulzné excitačné žiarenie s obdobím 1C - viac ako 1000 impulzov sa používa na účtovníctvo), čo vedie k akumulácii (zisk) prospešného signálu. Opísaný systém je implementovaný PerkinElmer, USA, nazývaným Delfia a má citlivosť viac ako 10-17 m v definícii antigénov.

2.3. Prietoková cytofluorimetria

Odporúčané

Načítava ...

hlavný > Dysarthri

Dvojstupňový útes mikrobiológie. Mechanizmus, účel uplatnenia imunofluorescenčnej reakcie (útes), typy útesov, zložiek

Odporúčané