Počet retikulocytov. Počítanie retikulocytov v nátere po ich zafarbení špeciálnymi farbivami

Je to spôsobené tým, že metóda je jednoduchá, pomerne lacná a nevyžaduje špeciálne drahé vybavenie, a preto môže byť použitá v akomkoľvek klinickom diagnostickom laboratóriu.

Princíp metódy

Detekcia granulárno-retikulárnej substancie retikulocytov pri supravitálnom farbení alkalickými farbami s ich ďalším počítaním v krvnom nátere.

Činidlá

Môžete použiť jedno z nasledujúcich farbív:

Nasýtený roztok brilantnej kresylovej modrej v absolútnom alkohole (na prípravu absolútneho alkoholu je potrebné namočiť 96% etanol v niekoľkých výmenách prášku kalcinovaného síranu meďnatého). Na 100 ml absolútneho alkoholu vezmite 1,2 g farby.
Roztok Azur I: Azur I – 1 g, šťavelan amónny – 0,4 g, chlorid sodný – 0,8 g, etanol 96% - 10 ml, destilovaná voda - 90 ml. Roztok farby v uzavretej fľaši sa umiestni do termostatu pri 37 °C na 2–3 dni a pravidelne sa intenzívne pretrepáva. Potom sa ochladí na teplotu miestnosti a prefiltruje sa cez papierový filter. Roztok sa uchováva v nádobe z tmavého skla. Ak sa objaví sediment, farba by sa mala znova prefiltrovať.
Roztok Azur II: Azur II – 1 g, citrát sodný – 5 g, chlorid sodný – 0,4 g, destilovaná voda – 45 ml. Roztok sa nechá 2 dni v termostate pri 37 °C za občasného miešania. Na urýchlenie rozpúšťania je možné farbu zohrievať na miernom ohni 15 - 20 minút bez privedenia do varu. Ochlaďte na teplotu miestnosti a prefiltrujte. Skladujte v nádobách z tmavého skla.

Špeciálne vybavenie

Pokrok v odhodlaní

Farbenie retikulocytov sa vykonáva buď na skle alebo v skúmavke.

Farbenie retikulocytov na skle

Pri farbení retikulocytov na skle sa dobre umyté a odmastené sklíčko zahrieva nad plameňom horáka. Pomocou sklenenej tyčinky naneste na sklo kvapku jedného z vyššie uvedených farbív a pomocou brúseného skla pripravte náter. Skloograf sa používa na označenie strany skla, na ktorú je nanesená škvrna farby. V tejto forme je možné sklo pripraviť na budúce použitie a uskladniť na suchom a tmavom mieste. Pred analýzou pripravte mokrú komoru. Zvyčajne sa na to používa Petriho miska s rolkami navlhčenej vaty alebo filtračným papierom umiestneným po okrajoch. Kvapku krvi naneste na škvrnu farby, pripravte z nej tenkú škvrnu a ihneď ju vložte na 3 až 10 minút do vlhkej komory. Potom sa nátery vysušia na vzduchu.

Farbenie retikulocytov in vitro

Farbenie retikulocytov v skúmavke sa líši pri použití rôznych farbív.

Metóda 1 – farbenie retikulocytov v skúmavke brilantnou kresylovou modrou.

Pred použitím pripravte v skúmavke pracovný roztok brilantnej krezylovej modrej na kvapku 1% roztoku šťavelanu draselného a 4 kvapky roztoku brilantnej krezylovej modrej. Pridajte 0,04 ml krvi do farby (dve pipety po značku 0,02). Zmes sa dôkladne, ale jemne premieša a nechá sa 30 minút. Potom znova premiešajte a pripravte tenké maznice.

Metóda 2 - farbenie retikulocytov v skúmavke s Azur II.

Metóda 3 - farbenie retikulocytov v skúmavke s Azure I.

V súčasnosti sú komerčne dostupné hotové, továrensky vyrobené farbivá pre retikulocyty. Retikulocyty sa s nimi farbia podľa priložených pokynov.

Počet retikulocytov.

Nátery pripravené pomocou jednej z vyššie uvedených metód sa skúmajú mikroskopicky pomocou imerznej šošovky. V nátere sú retikulocyty a erytrocyty sfarbené do žltkastozelena, granulárna vláknitá látka v retikulocytoch je modrá (pri farbení azúrovou II a brilantnou kresylovou modrou) alebo modrofialová (pri farbení azúrovou I).

Fotografie retikulocytov:

Nájdite oddelene zorné polia, kde sa nachádzajú červené krvinky. V týchto zorných poliach je potrebné napočítať aspoň 1000 červených krviniek a medzi nimi zaznamenať počet červených krviniek obsahujúcich granulárno-vláknitú látku. Väčšia presnosť sa dosiahne pri počítaní 2000 - 3000 červených krviniek.

Vzhľadom k tomu, že zorné pole je umiestnené veľké množstvočervených krviniek, čo sťažuje počítanie, je potrebné obmedziť (zmenšiť) zorné pole. Na tento účel môžete použiť buď špeciálny okulár, v ktorom môžete zmenšiť zorné pole na požadovanú veľkosť, alebo použiť špeciálne „okno“ (z papiera je vyrezaný kruh s priemerom o niečo menším ako okulár, v strede kruhu sa vyreže malý diamant a výsledné okienko sa vloží do okuláru).

Počet spočítaných retikulocytov je vyjadrený na 100 (v percentách) alebo na 1000 (v ppm) červených krviniek.

Príklad: Pri spočítaní 1 000 červených krviniek v nátere sa zistilo, že 15 červených krviniek z 1 000 má zrnitú sieťovinu rôzneho stupňa, to znamená, že ide o retikulocyty. Preto počet retikulocytov v v tomto prípade je 1,5 % alebo 15‰.

Literatúra:

Adresár "Laboratórne metódy výskumu na klinike" editoval Menshikov V.V. - Moskva, "Medicína", 1987
Lyubina A. Ya., Ilyicheva L. P. a spoluautori - „Clinical laboratórny výskum" - Moskva, "Medicína", 1984

Počet retikulocytov pomocou fluorescenčnej mikroskopie

Metóda počítania počtu retikulocytov pomocou fluorescenčnej mikroskopie je jednoduchá a vyžaduje málo času a je presnejšia v porovnaní s obvyklý spôsob, keďže fluorescenčná mikroskopia odhaľuje drobné zrnká retikulárno-vláknitej látky.

Retikulocyty

Retikulocyty sú mladé červené krvinky vytvorené po tom, čo normoblasty stratia svoje jadrá. Charakteristickým znakom retikulocytov je prítomnosť v ich cytoplazme granulárno-vláknitej látky (retikulum), ktorá predstavuje agregované ribozómy a mitochondrie.

Patologické inklúzie v červených krvinkách

Jollyho telieska (Howell-Jollyho telieska) sú malé okrúhle fialovočervené inklúzie s veľkosťou µm, nachádzajúce sa 1 (menej často 2 - 3) v jednom erytrocyte. Predstavujú zvyšok jadra po odstránení jeho OZE. Zisťujú sa pri intenzívnej hemolýze a „preťažení“ RES, po splenektómii, s megaloblastickou anémiou.

Cytochemické štúdium lipidov

Cytochemické štúdium lipidov je založené na použití farbív rozpustných v tukoch (sudan III, sudan IV, čierny sudan atď.). Na identifikáciu neutrálneho tuku sa používa Sudan III, ktorý zafarbí tuk do oranžova. Lipoidy lepšie deteguje sudánska čerň (čierne sfarbenie).

Analýza moču podľa Nechiporenka

Nechiporenko metóda v domácnosti laboratórna diagnostika je najbežnejšou metódou kvantifikácia vytvorené prvky v moči. Táto metóda je najjednoduchšia, dostupná pre každé laboratórium a vhodná v ambulantnej praxi a má tiež množstvo výhod oproti iným známym kvantitatívnym metódam na štúdium močového sedimentu. Pomocou metódy Nechiporenko sa stanoví počet vytvorených prvkov (erytrocyty, leukocyty a valce) v 1 ml moču.

Metódy farbenia retikulocytov

Princíp. Supravitálne farbenie farbivami, ktoré odhaľujú granulárno-retikulárnu substanciu retikulocytov.

Činidlá. Môžete použiť jedno z nasledujúcich farbív: 1) nasýtený roztok brilantnej kresylovej modrej v absolútnom etylalkohole. Ak chcete pripraviť absolútny alkohol, musíte namočiť 96% etanol v niekoľkých výmenách prášku kalcinovaného síranu meďnatého. Na 100 ml absolútneho alkoholu vezmite 1,2 g farby; 2) roztok azúru 1 podľa P.N. Korikova: azúr I - 1 g; šťavelan amónny - 0,4 g; chlorid sodný - 0,8 g; 96% etylalkohol - 10 ml; destilovaná voda - 90 ml. Roztok farby v uzavretej fľaši sa umiestni do termostatu pri 37 °C na 2–3 dni a pravidelne sa intenzívne pretrepáva. Potom sa ochladí na teplotu miestnosti a prefiltruje sa cez papierový filter. Roztok sa uchováva v nádobe z tmavého skla. Ak sa objaví sediment, farba by sa mala znova prefiltrovať; 3) roztok Azur II: Azur II - 1 g; citrát sodný - 5 g; chlorid sodný - 0,4 g; destilovaná voda - 45 ml. Roztok sa nechá 2 dni v termostate pri 37 °C za občasného miešania. Na urýchlenie rozpúšťania sa farba môže zahrievať na miernom ohni 15–20 minút bez toho, aby sa priviedla do varu. Ochlaďte na teplotu miestnosti a prefiltrujte. Skladujte v nádobách z tmavého skla.

Pokrok v odhodlaní. Maľba na sklo. Dobre umyté a odmastené sklíčko sa zahrieva nad plameňom horáka.

Pomocou sklenenej tyčinky nanesieme na sklo kvapku jedného z farbív a pripravíme maľovku pomocou brúseného skla. Steklografom označte stranu skla, na ktorej je nanesený ťah farby. V tejto forme je možné sklo pripraviť na budúce použitie a uskladniť na suchom a tmavom mieste. Naneste kvapku krvi na škvrnu farby, pripravte z nej tenkú škvrnu a ihneď ju umiestnite na 3–4 minúty do vlhkej komory (môžete použiť Petriho misku s rolkami navlhčenej vaty, gázy alebo filtračného papiera). okraje). Potom sa nátery vysušia na vzduchu.

V takto pripravených náteroch sú červené krvinky sfarbené do žltkasto-zelena, zrnitá sitová látka je sfarbená Modrá farba.

Farbenie in vitro. Metóda 1: pred použitím pripravte pracovný roztok brilantnej kresylovej modrej v skúmavke v množstve 1 kvapka 1% roztoku šťavelanu draselného a 4 kvapky roztoku farby (činidlo 1). Pridajte 0,04 ml krvi do farby (dve pipety po značku 0,02). Zmes sa dôkladne, ale jemne premieša a nechá sa 30 minút. Miešajte a pripravte tenké maznice.

Metóda 2: 0,05 ml roztoku farbiva 3 a 0,2 ml krvi sa umiestni do skúmavky. Zmes sa dôkladne premieša a nechá sa 20-30 minút. Miešajte a pripravte tenké maznice.

Metóda 3: pridajte 0,3 – 0,5 ml roztoku farby 2 a 5 – 6 kvapiek krvi do skúmavky pomocou pipety z Pančenkovovho prístroja. Skúmavka sa uzavrie gumenou zátkou, zmes sa dôkladne, ale opatrne premieša a nechá sa 1–1,5 hodiny (retikulocyty sa lepšie farbia pri expozícii 1,5–3 hodiny). Miešajte a pripravte tenké maznice.

Počet retikulocytov. V náteroch sú červené krvinky sfarbené do žltkasto-zelena, zrnitá sieťovitá látka je modrá alebo modrofialová.

Nátery pripravené pomocou jednej z vyššie uvedených metód sa skúmajú mikroskopicky pomocou imerznej šošovky. Je potrebné napočítať aspoň 1000 červených krviniek (vyššia presnosť sa dosiahne pri počítaní 2000–3000 červených krviniek) a medzi nimi zaznamenať počet buniek obsahujúcich granulárno-retikulárnu látku. V praxi sa pre väčšiu presnosť používa špeciálny okulár, v ktorom sa dá zorné pole zmenšiť na požadovanú veľkosť. Pre rovnomerné tenké nátery, v ktorých sú červené krvinky umiestnené v jednom rade, vyberte zorné pole, v ktorom je napríklad 50 červených krviniek, a potom vypočítajte 20 takýchto zorných polí.

Ak nemáte hotový okulár, ľahko si ho pripravíte tak, že odskrutkujete 7× okulár, vložíte doň papierik s vystrihnutým malým štvorčekom a priskrutkujete. Počet spočítaných retikulocytov je vyjadrený na 1000 alebo na 100 červených krviniek.

Technika odberu krvi na retikulocyty a technika počítania počtu retikulocytov.

Počítanie retikulocytov v nátere po ich zafarbení špeciálnymi farbivami

Princíp metódy: Detekcia granulárno-retikulárnej substancie retikulocytov pri supravitálnom farbení alkalickými farbami s ich ďalším počítaním v krvnom nátere.

Môžete použiť jedno z nasledujúcich farbív: Azur roztok I; Azur roztok II;

Postup stanovenia: Farbenie sa vykonáva buď na skle alebo v skúmavke.

Farbenie retikulocytov v skúmavke s Azure II

Do skúmavky sa vloží 0,05 ml roztoku farbiva azure II a 0,2 ml krvi. Zmes sa dôkladne premieša a nechá sa 20 - 30 minút. Znova premiešajte a pripravte tenké maznice.

Farbenie retikulocytov v skúmavke s Azure I

Pomocou pipety z Pančenkovovho prístroja dajte do skúmavky 0,3–0,5 ml roztoku farbiva azur I a 5–6 kvapiek krvi. Skúmavka sa uzavrie gumenou zátkou, zmes sa dôkladne, ale opatrne premieša a nechá sa 1 - 1,5 hodiny (retikulocyty sa lepšie farbia pri expozícii 1,5 - 3 hodiny). Miešajte a pripravte tenké maznice.

Pripravené nátery sa mikroskopicky skúmajú pomocou imerznej šošovky. V nátere sú retikulocyty a erytrocyty sfarbené do žltkastozelena, zrnitá vláknitá látka v retikulocytoch je modrá (pri farbení azúrom II) alebo modrofialová (pri farbení azúrom I).

Retikulocyty sú dôležitým indikátorom regeneračnej schopnosti kostná dreň. Ich zvýšenie periférna krv(retikulocytóza) sa pozoruje pri hemolytickej anémii, pri hemolytických krízach, pri akútnej strate krvi, malárii, pri liečbe anémie z nedostatku železa železom, pri akútnom nedostatku kyslíka. Prítomnosť zvýšeného počtu retikulocytov umožňuje podozrenie na skryté krvácanie (napríklad u pacientov s brušným týfusom, peptický vred).

Zníženie počtu alebo absencia retikulocytov (retikulocytopénia) sa pozoruje pri aregeneratívnej aplastickej a hypoplastickej anémii; anémia spôsobená nedostatkom železa, vitamínu B12, kyseliny listovej; s rakovinovými metastázami do kostí; choroba z ožiarenia; liečenie ožiarením; liečba cytostatikami.

Technika vykonávania testu Rivalta.

Rivalta test je biochemický test na rozlíšenie transudátu a exsudátu.

Technika je nasledovná: Exsudáty obsahujú seromucín (zlúčeninu globulínovej povahy), ktorý dáva pozitívny test (denaturácia) so slabým roztokom kyseliny octovej. Do valca sa naleje 100-150 ml destilovanej vody, okyslí sa 2-3 kvapkami ľadovej kyseliny octovej a po kvapkách sa pridáva testovaná kvapalina. Padajúca kvapka exsudátu vytvára oblak vo forme bieleho oblaku, ktorý klesá na dno nádoby. Kvapka transudátu nevytvára zákal, alebo je nepatrná a rýchlo sa rozpúšťa. Napriek týmto rozdielom medzi exsudátmi a transudátmi nie je v praxi vždy ľahké ich rozlíšiť, pretože niekedy sa musíte vysporiadať s množstvom prechodných tekutín, ako aj exsudátov, ktoré sú obsahom bielkovín a relatívnou hustotou blízke transudátom.

Metódy na počítanie počtu retikulocytov

1. Počítanie počtu retikulocytov v nátere po ich zafarbení špeciálnymi farbivami.

Táto metóda je v praxi najpoužívanejšou metódou, pretože je jednoduchá, pomerne lacná a nevyžaduje špeciálne drahé vybavenie, a preto sa dá použiť v akomkoľvek klinickom diagnostickom laboratóriu.

Princíp metódy je založený na identifikácii granulárno-retikulárnej substancie retikulocytov pri supravitálnom farbení alkalickými farbami (nasýtený roztok brilantnej kresylovej modrej v absolútnom alkohole + roztok Azur I + roztok Azur II) s ich ďalším počítaním v krvnom nátere. Farbenie retikulocytov sa vykonáva buď na skle alebo v skúmavke.

Počítanie sa uskutočňuje pomocou mikroskopu: nátery pripravené pomocou jednej z vyššie uvedených metód sa mikroskopicky skúmajú ponornou šošovkou; v nátere sú retikulocyty a erytrocyty sfarbené do žltkastozelena, zrnitá vláknitá látka v retikulocytoch je modrá (pri farbení azúrovou II a brilantnou kresylovou modrou) alebo modrofialová (pri farbení azúrovou I).

2. Počítanie počtu retikulocytov pomocou fluorescenčnej mikroskopie.

Táto metóda je jednoduchá a vyžaduje málo času, je presnejšia ako konvenčná metóda, pretože luminiscenčná mikroskopia odhaľuje najmenšie zrná sieťovo-vláknitej látky, ale je možná len s luminiscenčným mikroskopom a špeciálnymi farbivami, a preto je dostupná len do niekoľkých laboratórií.

Princíp počítania počtu retikulocytov pomocou luminiscenčnej mikroskopie je založený na schopnosti látky retikulocytov fluoreskovať po ošetrení krvi akridínovou oranžou. Krv sa zmieša s akridínovou oranžovou v skúmavke alebo mixéroch v pomere 1 diel krvi a 10 dielov farby. Zmes sa mieša 2 minúty, kvapka zmesi sa nanesie na podložné sklíčko a prikryje sa krycím sklíčkom. V tomto prípade by kvapalina nemala presahovať krycie sklíčko.

Mikroskopia pomocou svetelného filtra ZhS-17. V prípravku majú červené krvinky tmavozelené obrysy a nefluoreskujú a v retikulocytoch látka zrnitého pletiva žiari jasnočerveno, vďaka čomu sa retikulocyty ľahko počítajú. V krvi stabilizovanej heparínom alebo citrátom sodným sa fluorescencia retikulocytov nepozoruje.

3. Automatické počítanie počtu retikulocytov pomocou hematologického analyzátora.

V moderných hematologických analyzátoroch je technológia počítania krviniek založená na konduktometrickej metóde, ktorú navrhli H. Wallace a Joseph R. Culter v roku 1947. Princípom metódy je spočítať počet a určiť povahu impulzov, ktoré vznikajú pri prechode článku cez otvor (otvoru) s malým priemerom, na ktorého oboch stranách sú dve od seba izolované elektródy. Každý prechod bunky cez otvor je sprevádzaný objavením sa elektrického impulzu, ktorý je zaznamenaný elektronickým snímačom. Rozdelenie buniek do kategórií (erytrocyty, leukocyty, krvné doštičky, sediment) vykonáva prístroj na základe analýzy amplitúdy prijatých impulzov. Na určenie koncentrácie buniek stačí prejsť kanálom určitý objem vzorky a spočítať počet generovaných impulzov.

Je potrebné poznamenať, že okrem klasického parametra retikulocytov - relatívneho (percentuálneho) obsahu retikulocytov (RET %, percento retikulocytov), stanoveného pomocou metód 1 a 2 laboratórnej diagnostiky, v dôsledku nástupu high-tech hematologických analyzátorov (metóda 3), je možné získať (napríklad použitím patentovaného fluorescenčného farbiva pre analyzátor Sysmex-XT-200i) ďalšie informatívne neretikulocytové parametre:

1. Retikulocyty s nízkym obsahom RNA, najzrelšie (LFR %, nízko fluorescenčné frakcie retikulocytov, frakcia retikulocytov s nízkou fluorescenciou).

2. Retikulocyty s priemerným obsahom RNA (MFR %, stredne fluorescenčné frakcie retikulocytov, frakcia retikulocytov s priemernou fluorescenciou).

3. Retikulocyty s vysokým obsahom RNA (HFR %, vysoko fluorescenčné frakcie retikulocytov, frakcia retikulocytov s vysokou fluorescenciou).

4. Frakcia nezrelých retikulocytov (IFR %, frakcia nezrelých retikulocytov).

Diferenciácia retikulocytov na základe stupňa zrelosti a podľa toho aj obsahu nukleových kyselín je odrazom hematopoetickej aktivity kostnej drene.

Metodika (analyzátor Sysmex-XT-2000i). V prietokovej cele bunky prechádzajú cez polovodičový laserový lúč, čo spôsobuje rozptyl lúča pod vysokým a nízkym uhlom a excitáciu fluorescenčného farbiva. To vám umožňuje určiť rôznych štádiách zrelosti retikulocytov na základe obsahu RNA v bunkách a intenzity ich luminiscencie. Automatizované počítanie retikulocytov je vysoko presné (spočíta sa viac červených krviniek) a reprodukovateľné (koeficient variácie je asi 6 %). Táto technológia zaisťuje presné počítanie retikulocytov aj pri extrémne nízkych koncentráciách.

Retikulocyty

Retikulointy sú mladé červené krvinky vytvorené po tom, čo normoblasty stratia svoje jadrá. Charakteristickým znakom retikulocytov je prítomnosť granulárno-vláknitej látky v cytoplazme, ktorá predstavuje agregované ribozómy a mitochondrie. Táto látka sa zisťuje pomocou špeciálnej metódy farbenia - supravital, t.j. bez predbežnej fixácie buniek. Granulovaná vláknitá látka v rôznych retikulocytoch sa vyznačuje polymorfizmom: čím je bunka mladšia, tým je látka hojnejšia. V najmladších retikulocytoch má tvar hrubej gule, v zrelších bunkách sa objavuje vo forme sieťky, jednotlivých nití a potom jednotlivých zŕn. V náteroch zafarbených konvenčnými hematologickými metódami sú retikulocyty sivoružovej farby - polychromatofilné, to znamená zafarbené rôznymi farbivami.

Počet retikulocytov sa určuje mikroskopiou špeciálne zafarbených náterov.

Jednotná metóda na počítanie počtu retikulocytov po ich zafarbení brilantnou kresylovou modrou, azúrovou I alebo azúrovou II priamo na skle alebo v skúmavke (1972).

Supravitálne farbenie farbivami, ktoré odhaľujú granulárno-vláknitú substanciu retikulocytov.

1. Nasýtený roztok brilantnej kresylovej modrej v absolútnom alkohole (na prípravu absolútneho alkoholu je potrebné namočiť 96% etanol v niekoľkých výmenách prášku kalcinovaného síranu meďnatého). Na 100 ml absolútneho alkoholu vezmite 1,2 g farby.

2. Roztok azúru I, navrhnutý P.N. Korikovom: azúr 1 - 1 g, šťavelan amónny - 0,4 g, chlorid sodný - 0,8 g, etylalkohol 96% 10 ml, destilovaná voda - 90 ml. Roztok farby v uzavretej fľaši sa umiestni do termostatu pri 37 °C na 2-3 dni a pravidelne sa intenzívne pretrepáva. Potom sa ochladí na teplotu miestnosti a prefiltruje sa cez papierový filter. Roztok sa uchováva v nádobe z tmavého skla. Ak sa objaví sediment, farba by sa mala znova prefiltrovať.

3. Roztok Azur II s nasledujúcim zložením: Azur II 1 g, citrát sodný 5 g, chlorid sodný 0,4 g, destilovaná voda 45 ml. Roztok sa nechá 2 dni v termostate pri 37 °C za občasného miešania. Na urýchlenie rozpúšťania sa farba môže minútu zahrievať na miernom ohni bez toho, aby sa priviedla do varu. Ochlaďte na izbovú teplotu a prefiltrujte). Skladujte v nádobách z tmavého skla.

Dobre umyté a odmastené sklíčko sa zahrieva nad plameňom horáka. Pomocou sklenenej tyčinky nanesieme na sklo kvapku jedného z farbív a pripravíme maľovku pomocou brúseného skla. Steklografom označte stranu skla, na ktorej je nanesený ťah farby. V tejto forme je možné sklo pripraviť na budúce použitie a uskladniť na suchom a tmavom mieste. Na škvrnu farby naneste kvapku krvi, pripravte z nej tenkú škvrnu a ihneď ju vložte na 3-4 minúty do vlhkej komôrky (môžete použiť Petriho misku s rolkami navlhčenej vaty alebo filtračným papierom umiestneným po okrajoch ). Potom sa nátery vysušia na vzduchu.

V takto pripravených náteroch sú červené krvinky sfarbené do žltkasto-zelenkasté a zrnito-vláknitá látka je modrá.

Metóda 1: pred použitím pripravte v skúmavke pracovný roztok brilantnej kresylovej modrej na kvapku 1% roztoku šťavelanu draselného a 4 kvapky roztoku farby 1. Pridajte do farby 0,04 ml krvi (dve pipety do 0,02 značka). Zmes sa dôkladne, ale jemne premieša a nechá sa 30 minút. Miešajte a pripravte tenké maznice.

Metóda 2: 0,05 ml roztoku farbiva 3 a 0,2 ml krvi sa umiestni do skúmavky. Zmes dôkladne premiešame a necháme odstáť. Miešajte a pripravte tenké maznice.

Metóda 3: 0,3-0,5 ml roztoku farby 2 a 5-6 kvapiek krvi sa umiestni do skúmavky pomocou pipety z Panchenkovovho prístroja. Skúmavka sa zakryje gumenou zátkou, zmes sa dôkladne, ale opatrne premieša a nechá sa 1-2 hodiny (retikulocyty sa lepšie farbia pri expozícii 2-3 hodiny). Miešajte a pripravte tenké maznice.

V náteroch sú červené krvinky sfarbené do žltkasto-zelena, zrnito-vláknitá látka je modrá alebo modrofialová.

Nátery pripravené pomocou jednej z vyššie uvedených metód sa skúmajú mikroskopicky pomocou imerznej šošovky. Je potrebné napočítať aspoň 1000 červených krviniek a medzi nimi zaznamenať počet červených krviniek obsahujúcich zrnito-vláknitú látku. V praxi sa pre väčšiu presnosť používa špeciálny okulár, v ktorom sa dá zorné pole zmenšiť na požadovanú veľkosť. Pre rovnomerné tenké nátery, v ktorých sú červené krvinky umiestnené v jednom rade, vyberte zorné pole, v ktorom je napríklad 50 červených krviniek, a potom vypočítajte 20 takýchto zorných polí.

Ak nemáte hotový okulár, môžete si ho jednoducho pripraviť tak, že odskrutkujete okulár 10X, vložíte doň papierik s malým štvorčekom a priskrutkujete ho.

Počet spočítaných retikulocytov je vyjadrený na 1000 alebo na 100 červených krviniek.

Počítanie počtu retikulocytov pomocou fluorescenčnej mikroskopie.

Využitie schopnosti retikulocytovej substancie fluoreskovať po ošetrení krvi akridínovou oranžovou.

1. Roztok akridínovej oranže v izotonickom roztoku chloridu sodného a koncentrácii 1:5000. Na prípravu izotonického roztoku sa odporúča použiť destilovanú vodu pH 5,8-6,8 Roztok akridínovej oranžovej musí byť čerstvý; uchovávajte ho nie dlhšie ako 3-5 dní v tmavej fľaši so zabrúsenou zátkou.

2. Nefluorescenčný imerzný olej.

Môžete použiť afluol alebo bežný imerzný olej s fluorescenciou zhášanou nitrobenzénom (0,3 ml nitrobenzénu na 1 ml oleja). Yu. N. Zubrzhitsky navrhuje použitie destilovaného anizolu ako nefluorescenčného oleja.

Špeciálne vybavenie. Ultrafialový mikroskop MUF-ZM alebo fluorescenčný.

Krv sa zmieša s akridínovou oranžovou v skúmavke alebo mixéri v pomere 1 diel krvi a 10 dielov farby (zmes možno skladovať maximálne 5 hodín). Zmes sa mieša 2 minúty, kvapka zmesi sa nanesie na podložné sklíčko a prikryje sa krycím sklíčkom.

Mikroskopia pomocou svetelného filtra ZhS-17.

V prípravku červené krvinky nefluoreskujú, ale v retikulocytoch granulárno-vláknitá látka svieti jasnočerveno.

Bolo zaznamenané, že v krvi stabilizovanej heparínom alebo citrátom sodným nie je pozorovaná fluorescencia retikulocytov.

Metóda je jednoduchá a vyžaduje málo času; Vďaka jasnej žiare sa retikulocyty ľahko počítajú.

Normálne hodnoty. U zdravých ľudí je počet retikulocytov na míľu, alebo 0,2-1,2%.

Počet retikulocytov v krvi odráža regeneračné vlastnosti kostnej drene a jeho hodnotenie sa široko používa pri rôznych anémiách (pozri tabuľku 24). Zvýšenie počtu retikulocytov sa pozoruje po strate krvi, pri hemolytickej anémii, najmä počas krízy (počet retikulocytov môže byť zvýšený), ako aj pri liečbe Addison Birmerovej anémie vitamínom B12 (retikulocytová kríza - zvýšenie počet retikulocytov na 4. – 8. deň liečby). Zníženie počtu retikulocytov je charakteristické pre hypoplastickú anémiu, recidívu Addison-Birmerovej anémie

Stanovenie počtu retikulocytov sa môže použiť na stanovenie produkcie erytropoézy a na výpočet životnosti červených krviniek.

Literatúra. Gomzyakova N. V. Lab, prípad, 1960, č. 5, s. 38-39;

Zubzhitsky Yu. N. Lab. puzdro; 1967, č. 2, s. 35;

Retikulocyty (retikulocyty)

Morfológia a funkcie retikulocytov. Metódy počítania retikulocytov. Kvantitatívny obsah retikulocytov.

Morfológia a funkcie retikulocytov

Retikulocyty sú mladé červené krvinky vytvorené po tom, čo normoblasty stratia svoje jadrá.

Charakteristickým znakom retikulocytov je prítomnosť látky zrnitej sieťoviny, ktorá sa objavuje so supravitálnym zafarbením, t.j. bez predbežnej fixácie buniek.

Elektrónová mikroskopia ukázala, že štruktúry zrnitej siete sú zvyškami endoplazmatického retikula, ribozómov a mitochondrií obsahujúcich RNA. V retikulocytoch sa v malej miere syntetizuje proteín (globín), hem, puríny, pyrimidínové nukleotidy, fosfatidy a lipidy, ale RNA sa v nich nesyntetizuje. Počas 2 dní zostáva retikulocyt v krvnom obehu, po ktorom, keď sa RNA znižuje, stáva sa zrelým erytrocytom.

V náteroch zafarbených konvenčnými hematologickými metódami sú retikulocyty sivoružovej farby – polychromatofilné, t.j. maľované rôznymi farbami.

Metódy počítania retikulocytov

V súčasnosti sa používa jednotná metóda na počítanie počtu retikulocytov po ich zafarbení

brilantná kresylová modrá,
Azure I alebo
Azure II priamo na skle alebo v skúmavke.

1. Princíp metódy

Detekcia granulárno-retikulárnej substancie erytrocytov pri farbení alkalickými farbami s ich ďalším počítaním v krvnom nátere.

2. Činidlá:

a) nasýtený roztok brilantnej kresylovej modrej v absolútnom alkohole (na prípravu absolútneho alkoholu je potrebné namočiť 96% etanol v niekoľkých výmenách prášku kalcinovaného síranu meďnatého): 1,2 g farby na 100 ml alkoholu;

b) roztok azur I: azur I - 1 g, šťavelan amónny - 0,4 g, chlorid sodný - 0,8 g, etylalkohol 96% - 10 ml, destilovaná voda - 90 ml. Roztok farby v uzavretej fľaši sa umiestni do termostatu pri 37 °C na 2–3 dni a pravidelne sa intenzívne pretrepáva. Potom sa ochladí na teplotu miestnosti a prefiltruje sa cez papierový filter. Roztok sa uchováva v nádobe z tmavého skla. Ak sa objaví sediment, farba by sa mala znova prefiltrovať;

c) Roztok Azur II: Azur II - 1 g, citrát sodný - 5 g, chlorid sodný - 0,4 g, destilovaná voda - 45 ml. Roztok sa nechá 2 dni v termostate pri 37 °C za občasného miešania. Na urýchlenie rozpúšťania sa farba môže zahrievať na miernom ohni 15–20 minút bez toho, aby sa priviedla do varu. Ochlaďte na teplotu miestnosti a prefiltrujte. Skladujte v nádobách z tmavého skla.

3. Farbenie

dobre umyté a odmastené podložné sklíčko sa zahrieva nad plameňom horáka. Pomocou sklenenej tyčinky nanesieme na sklo kvapku jedného z farbív a pripravíme maľovku pomocou brúseného skla. Steklografom označte stranu skla, na ktorej je nanesený ťah farby. V tejto forme môže byť sklo pripravené na budúce použitie a skladované na suchom a tmavom mieste;
Do takto pripraveného pohára sa nanesie kvapka krvi, urobí sa tenký náter a pohár sa ihneď vloží do vlhkej komory. Na to použite Petriho misku s vekom, do ktorej sa po okrajoch vložia mierne navlhčené rolky gázy alebo bavlny;
Nátery sa uchovávajú vo vlhkej komore 3–5 minút a potom sa sušia na vzduchu. Zrnitá sitová substancia retikulocytov je namaľovaná fialovo-modrou farbou, jasne vystupujúca na zelenkavo-modrom pozadí erytrocytov.

spôsob 1: pred použitím pripravte do skúmavky pracovný roztok brilantnej kresylovej modrej na kvapku 1% roztoku šťavelanu draselného 4 kvapky roztoku farby 1. Do farby pridajte 40 μl krvi (dve pipety po značku 0,02 ). Zmes sa dôkladne, ale jemne premieša a nechá sa 30 minút. Miešajte a pripravte tenké šmuhy;
metóda 2: 0,05 ml roztoku farbiva 3 a 0,2 ml krvi sa umiestni do skúmavky. Zmes sa dôkladne premieša a nechá sa 20-30 minút. Miešajte a pripravte tenké šmuhy;
Metóda 3: 0,3–0,5 ml roztoku farbiva 2 a 5–6 kvapiek krvi sa umiestni do skúmavky pomocou pipety z Pančenkovovho prístroja. Skúmavka sa uzavrie gumenou zátkou, zmes sa dôkladne, ale opatrne premieša a nechá sa 1–1½ hodiny (retikulocyty sa lepšie farbia pri expozícii 1½–3 hodiny). Miešajte a pripravte tenké maznice.

4. Počet retikulocytov

V náteroch sú červené krvinky sfarbené do žltkasto-zelena, zrnito-vláknitá látka je modrá alebo modrofialová.

Nátery pripravené pomocou jednej z vyššie uvedených metód sa skúmajú mikroskopicky pomocou imerznej šošovky;
je potrebné napočítať aspoň 1000 červených krviniek a medzi nimi zaznamenať počet červených krviniek obsahujúcich zrnito-vláknitú látku. Pre rovnomerné tenké nátery, v ktorých sú červené krvinky umiestnené v jednom rade, vyberte zorné pole, v ktorom je napríklad 50 červených krviniek, a potom vypočítajte 20 takýchto zorných polí;
V praxi pre väčšiu presnosť využívajú špeciálny okulár, v ktorom sa dá zorné pole zmenšiť na požadovanú veľkosť. Ak nemáte hotový okulár, môžete si ho jednoducho pripraviť tak, že okulár ×7 odskrutkujete, vložíte doň papierik s vystrihnutým malým štvorčekom a priskrutkujete ho. Počet spočítaných retikulocytov je vyjadrený na 1000 alebo na 100 červených krviniek.

Kvantitatívny obsah retikulocytov

Zvýšenie počtu retikulocytov sa pozoruje pri:

strata krvi (najmä akútna);
hemolytická anémia, najmä počas krízy (až 20–30 %);
na pozadí liečby megaloblastickej anémie vitamínom B12 (retikulocytová kríza - zvýšenie počtu retikulocytov na 4.–8. deň liečby).

Zníženie počtu retikulocytov je charakteristické pre:

aplastická a hypoplastická anémia;
neliečená megaloblastická anémia;
choroba z ožiarenia;
užívanie cytostatických liekov.

Supravitálna metóda farbenia retikulocytov.

Detekcia granulárno-retikulárnej substancie retikulocytov pri farbení brilantnou krezylovou modrou bez predchádzajúcej fixácie.

1% roztok brilantnej kresylovej modrej: 50 mg farbiva sa rozpustí v 5 ml fyziologického roztoku a pridá sa 20 mg citrátu sodného (roztok sa skladuje v nádobe z tmavého skla, vydrží niekoľko dní).

Na podložné sklíčko s jamkou naneste 2 kvapky 1% roztoku brilantnej kresylovej modrej farby a 1 kvapku krvi. Opatrne premiešajte sklenenou tyčinkou a zmes sa umiestni do vlhkej komory (Petriho miska, do ktorej sa po okrajoch vložia zľahka navlhčené zvitky gázy alebo vaty) na 30 minút pri izbovej teplote. Potom sa urobia šmuhy a vysušia sa.

V náteroch sú červené krvinky sfarbené do žltozelena a granulárna-retikulárna látka v retikulocytoch je modrá a fialová.

Stery sa skúmajú mikroskopicky pomocou imerznej šošovky. Retikulocyty sa počítajú na 1000 červených krviniek (vyššia presnosť sa dosiahne pri počítaní červených krviniek).

Zvýšený počet retikulocytov pozorované, keď:

stimulácia erytropoézy (strata krvi, hemolýza, retikulocytová kríza s úspešnou liečbou anémie z nedostatku B12, akútny nedostatok kyslíka).

Znížený počet retikulocytov pozorované, keď:

inhibícia erytropoézy (aplastická a hypoplastická anémia, neliečená B 12 - anémia z nedostatku rakovinové metastázy do kostí),

ochorenia obličiek, endokrinné ochorenia.

METÓDY POČÍTANIA POČTU RETIKULOCYTOV

(1) Počítanie počtu retikulocytov v nátere po ich zafarbení špeciálnymi farbivami. Táto metóda je v praxi najpoužívanejšou, pretože je jednoduchá, pomerne lacná a nevyžaduje špeciálne drahé vybavenie, a preto môže byť použitá v akomkoľvek klinickom diagnostickom laboratóriu. Princíp metódy je založený na identifikácii granulárno-retikulárnej substancie retikulocytov pri supravitálnom farbení alkalickými farbami (nasýtený roztok brilantnej kresylovej modrej v absolútnom alkohole / roztok Azur I / roztok Azur II) s ich ďalším počítaním v krvnom nátere. Farbenie retikulocytov sa vykonáva buď na skle alebo v skúmavke. Počítanie sa uskutočňuje pomocou mikroskopu: nátery pripravené pomocou jednej z vyššie uvedených metód sa mikroskopicky skúmajú ponornou šošovkou; v nátere sú retikulocyty a erytrocyty sfarbené do žltkastozelena, zrnitá vláknitá látka v retikulocytoch je modrá (pri farbení azúrovou II a brilantnou kresylovou modrou) alebo modrofialová (pri farbení azúrovou I). (2) Počet retikulocytov pomocou fluorescenčnej mikroskopie. Táto metóda je jednoduchá a vyžaduje málo času, je presnejšia ako konvenčná metóda, pretože fluorescenčná mikroskopia odhaľuje najmenšie zrná sieťovo-vláknitej látky, ale je možná len s fluorescenčným mikroskopom a špeciálnymi farbivami, a preto je dostupná len do niekoľkých laboratórií. Princíp počítania počtu retikulocytov pomocou fluorescenčnej mikroskopie je založený na schopnosti látky retikulocytov fluoreskovať po ošetrení krvi akridínovou oranžou. Krv sa zmieša s akridínovou oranžovou v skúmavke alebo mixéri v pomere 1 diel krvi a 10 dielov farby (zmes možno skladovať maximálne 5 hodín). Zmes sa mieša 2 minúty, kvapka zmesi sa nanesie na podložné sklíčko a prikryje sa krycím sklíčkom. V tomto prípade by kvapalina nemala presahovať krycie sklíčko. Mikroskopia pomocou svetelného filtra ZhS-17. V prípravku majú červené krvinky tmavozelené obrysy a nefluoreskujú a v retikulocytoch látka zrnitého pletiva žiari jasnočerveno, vďaka čomu sa retikulocyty ľahko počítajú. V krvi stabilizovanej heparínom alebo citrátom sodným sa fluorescencia retikulocytov nepozoruje. (3) Automatické počítanie retikulocytov pomocou hematologického analyzátora. V moderných hematologických analyzátoroch je technológia počítania krviniek založená na konduktometrickej metóde, ktorú navrhol H. Wallace a Joseph R. Culter v roku 1947. Princípom metódy je spočítať počet a určiť povahu impulzov, ktoré vznikajú pri prechode článku cez otvor (otvoru) s malým priemerom, na oboch stranách ktorého sú dve elektródy izolované od seba. Každý prechod bunky cez otvor je sprevádzaný objavením sa elektrického impulzu, ktorý je zaznamenaný elektronickým snímačom. Rozdelenie buniek do kategórií (erytrocyty, leukocyty, krvné doštičky, sediment) vykonáva prístroj na základe analýzy amplitúdy prijatých impulzov.Na určenie koncentrácie buniek stačí prejsť určitý objem vzorky kanálom a spočítajte počet generovaných impulzov. Je potrebné poznamenať, že okrem klasického parametra retikulocytov - relatívneho (%) obsahu retikulocytov (RET%, percento retikulocytov), stanoveného pomocou metód 1 a 2 laboratórnej diagnostiky, v súvislosti s nástupom high-tech hematologickými analyzátormi (metóda 3) bolo možné získať (napríklad pomocou patentovaného fluorescenčného farbiva pre analyzátor Sysmex -XT-2000i) ďalšie informatívne parametre retikulocytov: retikulocyty s nízkym obsahom RNA, najzrelšie (LFR %, nízka fluorescencia frakcie retikulocytov); retikulocyty s priemerným obsahom RNA (MFR %, stredne fluorescenčné frakcie retikulocytov) - frakcia retikulocytov s priemernou fluorescenciou); retikulocyty s vysokým obsahom RNA (HFR %, vysoko fluorescenčné frakcie retikulocytov) - frakcia retikulocytov s vysokou fluorescenciou); frakcia nezrelých retikulocytov (IRF %, frakcia nezrelých retikulocytov). Diferenciácia retikulocytov na základe stupňa zrelosti a podľa toho aj obsahu nukleových kyselín je odrazom hematopoetickej aktivity kostnej drene. Metodika (analyzátor Sysmex -XT-2000i). V prietokovej cele bunky prechádzajú cez polovodičový laserový lúč, čo spôsobuje rozptyl lúča pod vysokým a nízkym uhlom a excitáciu fluorescenčného farbiva. To umožňuje určiť rôzne štádiá zrelosti retikulocytov na základe obsahu RNA v bunkách a intenzity ich luminiscencie. Automatizované počítanie retikulocytov je vysoko presné (spočíta sa viac červených krviniek) a reprodukovateľné (koeficient variácie je asi 6 %). Táto technológia zaisťuje presné počítanie retikulocytov aj pri extrémne nízkych koncentráciách.

Retikulocytopénia a retikulocytóza, príčiny vývoja, diagnostická hodnota ich detekcie.

Metóda na počítanie počtu retikulocytov po ich zafarbení brilantnou croesus silt modrou, azúrovou I alebo azúrovou II priamo na skle alebo v skúmavke

Princíp. Supravitálne farbenie farbivami, ktoré odhaľujú granulárno-vláknitú substanciu retikulocytov.

Činidlá. Môžete použiť jedno z nasledujúcich farbív.

1. Nasýtený roztok brilantnej kresylovej modrej v absolútnom alkohole (na prípravu absolútneho alkoholu je potrebné namočiť 96% etanol v niekoľkých výmenách kalcinovaného práškového síranu meďnatého).

2. Roztok azúru I, navrhnutý P.N. Korikovom: azúr I - 1 g, šťavelan amónny - 0,4 g, chlorid sodný - 0,8 g, etylalkohol 96% - 10 ml, destilovaná voda - 90 ml. Roztok farby v uzavretej fľaši sa umiestni do termostatu pri 37 °C na 2-3 dni a pravidelne sa napája. Dôrazne pretrepte. Potom sa ochladí na teplotu miestnosti a prefiltruje sa cez papierový filter. Roztok sa uchováva v nádobe z tmavého skla. Ak sa objaví sediment, farba by sa mala znova prefiltrovať.

3. Roztok Azur II s nasledujúcim zložením: Azur II - 1 g, citrát sodný - 5 g, chlorid sodný - 0,4 g, destilovaná voda - 45 ml. Roztok sa nechá 2 dni v termostate pri 37 °C za občasného miešania. Na urýchlenie rozpúšťania sa farba môže minútu zahrievať na miernom ohni bez toho, aby sa priviedla do varu. Ochlaďte na teplotu miestnosti a prefiltrujte. Skladujte v nádobách z tmavého skla.

Špeciálne vybavenie. Mikroskop.

Pokrok v odhodlaní. Približne 1\ra^1\th pi s.ek/.e. Dobre umyté a odmastené sklíčko sa zahrieva nad plameňom horáka. Pomocou sklenenej tyčinky nanesieme na sklo kvapku jedného z farbív a pripravíme maľovku pomocou brúseného skla. Steklografom označte stranu skla, na ktorej je nanesený ťah farby. V tejto forme je možné sklo pripraviť na budúce použitie a uskladniť na suchom a tmavom mieste. Naneste kvapku krvi na telo. Idem z nej von

tenkú vrstvu a ihneď vložte do vlhkej komory na 3-4 minúty (môžete použiť Petriho misku s rolkami navlhčenej vaty alebo filtračným papierom umiestneným po okrajoch). Potom sa nátery vysušia na vzduchu.

Farbenie in vitro. Spôsob /: pred použitím pripravte do skúmavky pracovný roztok brilantnej kresylovej modrej na kvapku 1% roztoku šťavelanu draselného 4 kvapky roztoku farby 1. Do farby pridajte 0,04 ml krvi (dve pipety po značku 0,02 ). Zmes sa dôkladne, ale jemne premieša a nechá sa 30 minút, premieša sa a pripravia sa tenké maznice.

Metóda 2: 0,05 ml roztoku farbiva 3 a 0,2 ml krvi sa umiestni do skúmavky. Zmes dôkladne premiešame a necháme odstáť. Miešajte a pripravte tenké maznice.

Metóda 3: 0,3-0,5 ml roztoku farby 2 a 5-6 kvapiek krvi sa umiestni do skúmavky pomocou pipety z Panchenkovovho prístroja. Skúmavka sa uzavrie gumovou zátkou, zmes sa dôkladne, ale opatrne premieša a nechá sa 1,5 hodiny (retikulocyty sa lepšie farbia pri expozícii 1/2-3 hodiny). Miešajte a pripravte tenké maznice.

Počet retikulocytov. V náteroch sú červené krvinky sfarbené do žltkasto-zelena, zrnito-vláknitá látka je modrá alebo modrofialová.

Nátery pripravené pomocou jednej z vyššie uvedených metód sa mikroskopujú okamžitou šošovkou. Nsobhidimi počítajú najmenej 1 000 červených krviniek a zaznamenajú medzi nimi počet červených krviniek obsahujúcich granulitídu. V praxi sa pre väčšiu presnosť používa špeciálny okulár, v ktorom sa dá zorné pole zmenšiť na požadovanú veľkosť. Pre rovnomerné tenké nátery, v ktorých sú červené krvinky umiestnené v jednom rade, vyberte zorné pole, v ktorom je napríklad 50 červených krviniek, a potom vypočítajte 20 takýchto zorných polí. Ak nemáte hotový okulár, ľahko si ho pripravíte tak, že odskrutkujete 7x okulár, vložíte doň papierik s vystrihnutým malým štvorčekom a priskrutkujete. Počet spočítaných retikulocytov je vyjadrený na 1000 alebo na 100 erytrocytov.

Retikulocyty

Retikulocyty sú mladé červené krvinky vytvorené po tom, čo normoblasty stratia svoje jadrá. Charakteristickým znakom retikulocytov je prítomnosť granulárno-vláknitej látky v cytoplazme, ktorá predstavuje agregované ribozómy a mitochondrie. Táto látka sa zisťuje pomocou špeciálnej metódy farbenia - supravitálnej (intravitálnej), t.j. bez predbežnej fixácie buniek. Granulovaná vláknitá látka v rôznych retikulocytoch je charakterizovaná polymorfizmom; Čím je bunka mladšia, tým je látka hojnejšia. V najmladších retikulocytoch má tvar hrubej gule, v zrelších bunkách sa objavuje vo forme sieťky, jednotlivých nití a potom jednotlivých zŕn. V náteroch zafarbených konvenčnými hematologickými metódami sú retikulocyty sivoružovej farby - polychromatofilné, to znamená zafarbené rôznymi farbivami.

Počet retikulocytov sa určuje mikroskopiou špeciálne zafarbených náterov

3.2.1 Spôsob farbenia krvných náterov na retikulocyty podľa Alekseeva (počítanie podľa Fonia)

Princíp: Metóda je založená na počítaní počtu retikulocytov vo zafarbených krvných náteroch na 1000 červených krviniek. Súčasne sa pripravia dva nátery (pre krvné doštičky a retikulocyty).

Činidlo: pracovný roztok farby podľa Alekseeva

Postup stanovenia: Do kapiláry sa odoberie pracovný roztok na stanovenie ESR po značku 0,75 µl a z punkcie z prsta pacienta sa odoberie plná kapilára krvi. Pomer farbiva ku krvi je 1:4. Zmes sa nechá 2 hodiny, potom sa na podložnom sklíčku vytvorí tenký náter. Náter sa suší na vzduchu a skúma sa pod ponorným mikroskopom.

Počítanie sa uskutočňuje nasledovne: mriežky retikulocytov sú zafarbené modrou farbou. Pri počítaní červených krviniek sa počíta počet retikulocytov v zornom poli. Spočíta sa 1000 červených krviniek. Výsledok je vyjadrený v percentách.

Štandardná hodnota: Krv zdravého človeka obsahuje 0,2-1,0 %

(alebo 2-10 dokonca povolených až do 12 ppm) retikulocytov

Klinický a diagnostický význam: Výskyt retikulocytov v periférnej krvi indikuje zvýšenú funkciu kostnej drene a používa sa pri hodnotení rôzne druhy anémia.

Zvýšenie počtu retikulocytov sa pozoruje po strate krvi s hemolytickou anémiou

Ťažká retikulocytóza - pozorovaná pri hemolytickej žltačke

Zníženie počtu retikulocytov v prítomnosti anémie naznačuje aplastický typ hematopoézy.

Podľa hladiny retikulocytov v krvi sa anémia delí na:

Regeneračné (počet retikulocytov je 0,5-5% - ide o posthemoragickú anémiu);

Hyperregeneratívne (počet retikulocytov viac ako 5% je hemolytická anémia);

Hypo- a aregeneratívne (počet retikulocytov je znížený alebo chýbajú, napriek tomu ťažký priebeh anémia – hypo- a aplastická, železitá- a. B 12 - anémia z nedostatku).

V náteroch sú červené krvinky sfarbené do žltozelena a granulárna-retikulárna látka v retikulocytoch je modrá a fialová.

Stery sa skúmajú mikroskopicky pomocou imerznej šošovky. Retikulocyty sa počítajú na 1000 červených krviniek (vyššia presnosť sa dosiahne pri počítaní červených krviniek).

Zvýšený počet retikulocytov pozorované, keď:

stimulácia erytropoézy (strata krvi, hemolýza, retikulocytová kríza s úspešnou liečbou anémie z nedostatku B12, akútny nedostatok kyslíka).

Znížený počet retikulocytov pozorované, keď:

inhibícia erytropoézy (aplastická a hypoplastická anémia, neliečená anémia z nedostatku B12, rakovinové metastázy v kostiach),

ochorenia obličiek, endokrinné ochorenia.

METÓDY POČÍTANIA POČTU RETIKULOCYTOV

Retikulocytopénia a retikulocytóza, príčiny vývoja, diagnostická hodnota ich detekcie.

Ak chcete pokračovať v sťahovaní, musíte zhromaždiť obrázok:

Technika odberu krvi na retikulocyty a technika počítania počtu retikulocytov.

Princíp metódy: Detekcia granulárno-retikulárnej substancie retikulocytov pri supravitálnom farbení alkalickými farbami s ich ďalším počítaním v krvnom nátere.

Môžete použiť jedno z nasledujúcich farbív: Azur roztok I; Azur roztok II;

Postup stanovenia: Farbenie sa vykonáva buď na skle alebo v skúmavke.

Farbenie retikulocytov v skúmavke s Azure II

Farbenie retikulocytov v skúmavke s Azure I

Retikulocyty sú dôležitým indikátorom regeneračnej schopnosti kostnej drene. Ich zvýšenie v periférnej krvi (retikulocytóza) sa pozoruje pri hemolytickej anémii, pri hemolytických krízach, pri akútnej strate krvi, malárii, pri liečbe anémie z nedostatku železa železom, pri akútnom nedostatku kyslíka. Prítomnosť zvýšeného počtu retikulocytov umožňuje podozrenie na skryté krvácanie (napríklad u pacientov s brušným týfusom, peptickým vredom).

Technika vykonávania testu Rivalta.

Rivalta test je biochemický test na rozlíšenie transudátu a exsudátu.

Počítanie retikulocytov v nátere

Princíp. Supravitálne farbenie farbivami, ktoré odhaľujú granulárno-retikulárnu substanciu retikulocytov.

Pokrok v odhodlaní. Maľba na sklo. Dobre umyté a odmastené sklíčko sa zahrieva nad plameňom horáka.

V takto pripravených náteroch sú červené krvinky sfarbené do žltkasto-zelenkasté a substancia zrnitého pletiva je modrá.

Farbenie in vitro. Metóda 1: pred použitím pripravte pracovný roztok brilantnej kresylovej modrej v skúmavke v množstve 1 kvapka 1% roztoku šťavelanu draselného a 4 kvapky roztoku farby (činidlo 1). Pridajte 0,04 ml krvi do farby (dve pipety po značku 0,02). Zmes sa dôkladne, ale jemne premieša a nechá sa 30 minút. Miešajte a pripravte tenké maznice.

Metóda 2: 0,05 ml roztoku farbiva 3 a 0,2 ml krvi sa umiestni do skúmavky. Zmes sa dôkladne premieša a nechá sa 20-30 minút. Miešajte a pripravte tenké maznice.

Počet retikulocytov. V náteroch sú červené krvinky sfarbené do žltkasto-zelena, zrnitá sieťovitá látka je modrá alebo modrofialová.

Retikulocyty (retikulocyty)

Morfológia a funkcie retikulocytov. Metódy počítania retikulocytov. Kvantitatívny obsah retikulocytov.

Morfológia a funkcie retikulocytov

Retikulocyty sú mladé červené krvinky vytvorené po tom, čo normoblasty stratia svoje jadrá.

Charakteristickým znakom retikulocytov je prítomnosť látky zrnitej sieťoviny, ktorá sa objavuje so supravitálnym zafarbením, t.j. bez predbežnej fixácie buniek.

V náteroch zafarbených konvenčnými hematologickými metódami sú retikulocyty sivoružovej farby – polychromatofilné, t.j. maľované rôznymi farbami.

Metódy počítania retikulocytov

V súčasnosti sa používa jednotná metóda na počítanie počtu retikulocytov po ich zafarbení

brilantná kresylová modrá,
Azure I alebo
Azure II priamo na skle alebo v skúmavke.

1. Princíp metódy

Detekcia granulárno-retikulárnej substancie erytrocytov pri farbení alkalickými farbami s ich ďalším počítaním v krvnom nátere.

2. Činidlá:

3. Farbenie

dobre umyté a odmastené podložné sklíčko sa zahrieva nad plameňom horáka. Pomocou sklenenej tyčinky nanesieme na sklo kvapku jedného z farbív a pripravíme maľovku pomocou brúseného skla. Steklografom označte stranu skla, na ktorej je nanesený ťah farby. V tejto forme môže byť sklo pripravené na budúce použitie a skladované na suchom a tmavom mieste;
Do takto pripraveného pohára sa nanesie kvapka krvi, urobí sa tenký náter a pohár sa ihneď vloží do vlhkej komory. Na to použite Petriho misku s vekom, do ktorej sa po okrajoch vložia mierne navlhčené rolky gázy alebo bavlny;
Nátery sa uchovávajú vo vlhkej komore 3–5 minút a potom sa sušia na vzduchu. Zrnitá sitová substancia retikulocytov je namaľovaná fialovo-modrou farbou, jasne vystupujúca na zelenkavo-modrom pozadí erytrocytov.

spôsob 1: pred použitím pripravte do skúmavky pracovný roztok brilantnej kresylovej modrej na kvapku 1% roztoku šťavelanu draselného 4 kvapky roztoku farby 1. Do farby pridajte 40 μl krvi (dve pipety po značku 0,02 ). Zmes sa dôkladne, ale jemne premieša a nechá sa 30 minút. Miešajte a pripravte tenké šmuhy;
metóda 2: 0,05 ml roztoku farbiva 3 a 0,2 ml krvi sa umiestni do skúmavky. Zmes sa dôkladne premieša a nechá sa 20-30 minút. Miešajte a pripravte tenké šmuhy;
Metóda 3: 0,3–0,5 ml roztoku farbiva 2 a 5–6 kvapiek krvi sa umiestni do skúmavky pomocou pipety z Pančenkovovho prístroja. Skúmavka sa uzavrie gumenou zátkou, zmes sa dôkladne, ale opatrne premieša a nechá sa 1–1½ hodiny (retikulocyty sa lepšie farbia pri expozícii 1½–3 hodiny). Miešajte a pripravte tenké maznice.

4. Počet retikulocytov

V náteroch sú červené krvinky sfarbené do žltkasto-zelena, zrnito-vláknitá látka je modrá alebo modrofialová.

Nátery pripravené pomocou jednej z vyššie uvedených metód sa skúmajú mikroskopicky pomocou imerznej šošovky;
je potrebné napočítať aspoň 1000 červených krviniek a medzi nimi zaznamenať počet červených krviniek obsahujúcich zrnito-vláknitú látku. Pre rovnomerné tenké nátery, v ktorých sú červené krvinky umiestnené v jednom rade, vyberte zorné pole, v ktorom je napríklad 50 červených krviniek, a potom vypočítajte 20 takýchto zorných polí;
V praxi pre väčšiu presnosť využívajú špeciálny okulár, v ktorom sa dá zorné pole zmenšiť na požadovanú veľkosť. Ak nemáte hotový okulár, môžete si ho jednoducho pripraviť tak, že okulár ×7 odskrutkujete, vložíte doň papierik s vystrihnutým malým štvorčekom a priskrutkujete ho. Počet spočítaných retikulocytov je vyjadrený na 1000 alebo na 100 červených krviniek.

Kvantitatívny obsah retikulocytov

Zvýšenie počtu retikulocytov sa pozoruje pri:

strata krvi (najmä akútna);
hemolytická anémia, najmä počas krízy (až 20–30 %);
na pozadí liečby megaloblastickej anémie vitamínom B12 (retikulocytová kríza - zvýšenie počtu retikulocytov na 4.–8. deň liečby).

Zníženie počtu retikulocytov je charakteristické pre:

aplastická a hypoplastická anémia;
neliečená megaloblastická anémia;
choroba z ožiarenia;
užívanie cytostatických liekov.

Počítanie retikulocytov v nátere po ich zafarbení špeciálnymi farbivami

Počítanie retikulocytov v nátere po ich zafarbení špeciálnymi farbivami je v praxi najpoužívanejšou metódou na počítanie počtu retikulocytov. Je to spôsobené tým, že metóda je jednoduchá, pomerne lacná a nevyžaduje špeciálne drahé vybavenie, a preto môže byť použitá v akomkoľvek klinickom diagnostickom laboratóriu.

Princíp metódy

Detekcia granulárno-retikulárnej substancie retikulocytov pri supravitálnom farbení alkalickými farbami s ich ďalším počítaním v krvnom nátere.

Činidlá

Môžete použiť jedno z nasledujúcich farbív:

Nasýtený roztok brilantnej kresylovej modrej v absolútnom alkohole (na prípravu absolútneho alkoholu je potrebné namočiť 96% etanol v niekoľkých výmenách prášku kalcinovaného síranu meďnatého). Na 100 ml absolútneho alkoholu vezmite 1,2 g farby.
Roztok azúru I: azúr I – 1 g, šťavelan amónny – 0,4 g, chlorid sodný – 0,8 g, etylalkohol 96 % – 10 ml, destilovaná voda – 90 ml. Roztok farby v uzavretej fľaši sa umiestni do termostatu pri 37 °C na 2–3 dni a pravidelne sa intenzívne pretrepáva. Potom sa ochladí na teplotu miestnosti a prefiltruje sa cez papierový filter. Roztok sa uchováva v nádobe z tmavého skla. Ak sa objaví sediment, farba by sa mala znova prefiltrovať.
Roztok Azur II: Azur II – 1 g, citrát sodný – 5 g, chlorid sodný – 0,4 g, destilovaná voda – 45 ml. Roztok sa nechá 2 dni v termostate pri 37 °C za občasného miešania. Na urýchlenie rozpúšťania je možné farbu zohrievať na miernom ohni 15 - 20 minút bez privedenia do varu. Ochlaďte na teplotu miestnosti a prefiltrujte. Skladujte v nádobách z tmavého skla.

Špeciálne vybavenie

Pokrok v odhodlaní

Farbenie retikulocytov sa vykonáva buď na skle alebo v skúmavke.

Farbenie retikulocytov na skle

Farbenie retikulocytov in vitro

Farbenie retikulocytov v skúmavke sa líši pri použití rôznych farbív.

Metóda 1 – farbenie retikulocytov v skúmavke brilantnou kresylovou modrou.

Metóda 2 - farbenie retikulocytov v skúmavke s Azur II.

Do skúmavky sa vloží 0,05 ml roztoku farbiva azure II a 0,2 ml krvi. Zmes sa dôkladne premieša a nechá sa 20 - 30 minút. Znova premiešajte a pripravte tenké maznice.

Metóda 3 - farbenie retikulocytov v skúmavke s Azure I.

V súčasnosti sú komerčne dostupné hotové, továrensky vyrobené farbivá pre retikulocyty. Retikulocyty sa s nimi farbia podľa priložených pokynov.

Počet retikulocytov.

Fotografie retikulocytov:

Vzhľadom na to, že v zornom poli je veľké množstvo červených krviniek, čo sťažuje počítanie, je potrebné obmedziť (zmenšiť) zorné pole. Na tento účel môžete použiť buď špeciálny okulár, v ktorom môžete zmenšiť zorné pole na požadovanú veľkosť, alebo použiť špeciálne „okno“ (z papiera je vyrezaný kruh s priemerom o niečo menším ako okulár, v strede kruhu sa vyreže malý diamant a výsledné okienko sa vloží do okuláru).

Počet spočítaných retikulocytov je vyjadrený na 100 (v percentách) alebo na 1000 (v ppm) červených krviniek.

Príklad: Pri spočítaní 1 000 červených krviniek v nátere sa zistilo, že 15 červených krviniek z 1 000 má zrnitú sieťovinu rôzneho stupňa, to znamená, že ide o retikulocyty. Preto je počet retikulocytov v tomto prípade 1,5% alebo 15‰.

Literatúra:

Adresár "Laboratórne metódy výskumu na klinike" editoval Menshikov V.V. - Moskva, "Medicína", 1987
Lyubina A. Ya., Ilyicheva L. P. a spoluautori - „Klinické laboratórne štúdie“ - Moskva, „Medicína“, 1984.

Počet retikulocytov pomocou fluorescenčnej mikroskopie

Metóda počítania počtu retikulocytov pomocou fluorescenčnej mikroskopie je jednoduchá a vyžaduje málo času a je presnejšia ako konvenčná metóda, pretože fluorescenčná mikroskopia odhaľuje najmenšie zrná retikulárnej filamentóznej látky.

Retikulocyty

Patologické inklúzie v červených krvinkách

Cytochemické štúdium lipidov

Analýza moču podľa Nechiporenka

Metóda Nechiporenko v domácej laboratórnej diagnostike je najbežnejšou metódou na kvantitatívne stanovenie vytvorených prvkov v moči. Táto metóda je najjednoduchšia, dostupná pre každé laboratórium a vhodná v ambulantnej praxi a má tiež množstvo výhod oproti iným známym kvantitatívnym metódam na štúdium močového sedimentu. Pomocou metódy Nechiporenko sa stanoví počet vytvorených prvkov (erytrocyty, leukocyty a valce) v 1 ml moču.

Metódy na počítanie počtu retikulocytov

1. Počítanie počtu retikulocytov v nátere po ich zafarbení špeciálnymi farbivami.

2. Počítanie počtu retikulocytov pomocou fluorescenčnej mikroskopie.

3. Automatické počítanie počtu retikulocytov pomocou hematologického analyzátora.

Vo väčšine domácich laboratórií sa retikulocyty počítajú v nátere po ich zafarbení špeciálnymi farbivami. Táto metóda je jednoduchá, ekonomická, nevyžaduje špeciálne drahé vybavenie, a preto ju možno použiť v akomkoľvek klinickom diagnostickom laboratóriu.

Druhá a tretia metóda počítania retikulocytov sú tiež pomerne jednoduché, ale z ekonomického hľadiska oveľa drahšie - vyžadujú drahé vybavenie (fluorescenčný mikroskop a hematologický analyzátor, ktorý počíta retikulocyty) a reagencie, a preto ich možno použiť len v niektoré laboratóriá.

Počet retikulocytov sa určuje mikroskopiou špeciálne zafarbených náterov.

Jednotná metóda na počítanie počtu retikulocytov po ich zafarbení brilantnou kresylovou modrou, azúrovou I alebo azúrovou II priamo na skle alebo v skúmavke (1972).

Princíp. Supravitálne farbenie farbivami, ktoré odhaľujú granulárno-vláknitú substanciu retikulocytov.

Činidlá. Môžete použiť jedno z nasledujúcich farbív.

Špeciálne vybavenie. Mikroskop.

Maľba na sklo.

V takto pripravených náteroch sú červené krvinky sfarbené do žltkasto-zelenkasté a zrnito-vláknitá látka je modrá.

Farbenie in vitro.

Metóda 2: 0,05 ml roztoku farbiva 3 a 0,2 ml krvi sa umiestni do skúmavky. Zmes dôkladne premiešame a necháme odstáť. Miešajte a pripravte tenké maznice.

V náteroch sú červené krvinky sfarbené do žltkasto-zelena, zrnito-vláknitá látka je modrá alebo modrofialová.

Počítanie počtu retikulocytov pomocou fluorescenčnej mikroskopie.

Princíp. Využitie schopnosti retikulocytovej substancie fluoreskovať po ošetrení krvi akridínovou oranžovou.

2. Nefluorescenčný imerzný olej. Môžete použiť afluol alebo obyčajný imerzný olej s fluorescenciou zhášanou nitrobenzénom (0,3 ml nitrobenzénu na 1 ml oleja). Yu. N. Zubrzhitsky navrhuje použitie destilovaného anizolu ako nefluorescenčného oleja. Špeciálne vybavenie. Ultrafialový mikroskop MUF-ZM alebo fluorescenčný.

Pokrok v odhodlaní. Krv sa zmieša s akridínovou oranžovou v skúmavke alebo mixéri v pomere 1 diel krvi a 10 dielov farby (zmes možno skladovať maximálne 5 hodín). Zmes sa mieša 2 minúty, kvapka zmesi sa nanesie na podložné sklíčko a prikryje sa krycím sklíčkom. Mikroskopia pomocou svetelného filtra ZhS-17. V prípravku červené krvinky nefluoreskujú, ale v retikulocytoch granulárno-vláknitá látka svieti jasnočerveno. Bolo zaznamenané, že v krvi stabilizovanej heparínom alebo citrátom sodným nie je pozorovaná fluorescencia retikulocytov. Metóda je jednoduchá a vyžaduje málo času; Vďaka jasnej žiare sa retikulocyty ľahko počítajú. Normálne hodnoty. U zdravých ľudí je počet retikulocytov na míľu, alebo 0,2-1,2%.

HLAVNÉ ETAPY METABOLIZMU ŽELEZA (TRANSPORT A UKLADANIE).

Transportný proteín (b-1-globulín), glykoproteín,
Prenáša Fe z gastrointestinálneho traktu do erytrokaryocytov a tkanivových zásob (pečeň a pod.).
Normálna hladina: 2,6±0,05 g/l.
Nasýtenie transferínu železom: 30-75%.
Do bunky vstupuje endocytózou: bunka zachytáva komplex Fe-transferín.

Retikulocyty

Počet retikulocytov sa určuje mikroskopiou špeciálne zafarbených náterov

3.2.1 Spôsob farbenia krvných náterov na retikulocyty podľa Alekseeva (počítanie podľa Fonia)

Činidlo: pracovný roztok farby podľa Alekseeva

Štandardná hodnota: Krv zdravého človeka obsahuje 0,2-1,0 %

(alebo 2-10 dokonca povolených až do 12 ppm) retikulocytov

Klinický a diagnostický význam: Výskyt retikulocytov v periférnej krvi svedčí o zvýšenej funkcii kostnej drene a využíva sa pri hodnotení rôznych typov anémie.

Zvýšenie počtu retikulocytov sa pozoruje po strate krvi s hemolytickou anémiou

Ťažká retikulocytóza - pozorovaná pri hemolytickej žltačke

Zníženie počtu retikulocytov v prítomnosti anémie naznačuje aplastický typ hematopoézy.

Podľa hladiny retikulocytov v krvi sa anémia delí na:

Regeneračné (počet retikulocytov je 0,5-5% - ide o posthemoragickú anémiu);

Hyperregeneratívne (počet retikulocytov viac ako 5% je hemolytická anémia);

Hypo- a aregeneratívne (počet retikulocytov je znížený alebo chýbajú, napriek ťažkej anémii - hypo- a aplastická anémia s nedostatkom železa a B12).

Pozor! Retikulocytóza v neprítomnosti anémie naznačuje skrytú, ale dobre kompenzovanú stratu krvi.

Recenzie uverejnené na tejto stránke sú osobnými názormi ľudí, ktorí ich napísali. Nevykonávajte samoliečbu!

Retikulocyty (klinický význam a laboratórna diagnostika)

(1) retikulocyty, ktoré majú jadro (erytronormoblasty) a ich zrnitosť je umiestnená vo forme hustého okraja okolo jadra;

(2) retikulocyty majúce substanciu zrnitého pletiva vo forme guľôčky alebo hrudky;

(3) retikulocyty, zrnité vo forme hustej siete;

(4) retikulocyty, ktoré majú substanciu zrnitého pletiva vo forme jednotlivých vlákien;

(5) retikulocyty obsahujúce jednotlivé granuly.

S hemolytickou anémiou (počet retikulocytov môže dosiahnuť 60% alebo viac (zvlášť silne sa zvyšuje počas hemolytických kríz);

Pri akútnej strate krvi (retikulocytová kríza nastáva 3–5 dní po strate krvi), vrátane zvýšenia retikulocytov, je možné podozrenie na skryté krvácanie (napríklad u pacientov s peptickým vredom tráviaceho traktu, brušným týfusom);

Pri liečbe anémie z nedostatku železa železom (niekoľko dní (3 - 10) po začatí antianemickej liečby pernicióznej anémie);

V prípade akútneho nedostatku kyslíka;

S nádorovými metastázami do kostnej drene.

Abnormálna forma hemoglobínu;

Na aregeneratívnu aplastickú a hypoplastickú anémiu;

Pri anémii spôsobenej nedostatkom železa, vitamínu B12, kyseliny listovej (mikrocytárno-hypochrómna a megaloblastická anémia);

So sideroblastickou anémiou;

S rakovinovými metastázami do kostí;

Na choroby z ožiarenia a radiačnú terapiu;

Pri liečbe cytostatikami;

Pri autoimunitných ochoreniach hematopoetického systému;

Pri ochoreniach obličiek;

S relapsom Addison-Biermerovej anémie;

Nesprávny výber antikoagulancia alebo nedostatočné premiešanie krvi s antikoagulantom;

Predĺžené stláčanie ruky turniketom;

Užívanie sulfónamidov (sú možné podhodnotené aj nadhodnotené výsledky);

Krvná transfúzia krátko pred štúdiou;

Hemolýza vzorky krvi.

Hodnotenie aktivity erytropoézy pri stavoch sprevádzaných hemolýzou alebo stratou krvi;

Hodnotenie schopnosti kostnej drene regenerovať sa po cytotoxickej terapii a transplantácii kostnej drene;

Hodnotenie obnovy syntézy erytropoetínu po transplantácii obličky;

Dopingová kontrola pre športovcov (užívanie erytropoetínu);

Diagnóza neúčinnej hematopoézy alebo zníženej tvorby červených krviniek;

Diferenciálna diagnostika anémie;

Detekcia narušenej regeneračnej schopnosti kostnej drene v dôsledku nedostatku železa, vitamínov B12, B6, folátu, medi a sledovanie vhodnej terapie;

Hodnotenie odpovede na liečbu erytropoetínom a erytrosupresormi.

Retikulocyty s nízkym obsahom RNA, najzrelšie (LFR %, nízko fluorescenčné frakcie retikulocytov);

Retikulocyty s priemerným obsahom RNA (MFR %, stredne fluorescenčné frakcie retikulocytov) - frakcia retikulocytov s priemernou fluorescenciou);

Retikulocyty s vysokým obsahom RNA (HFR %, vysoko fluorescenčné frakcie retikulocytov) - frakcia retikulocytov s vysokou fluorescenciou);

Frakcia nezrelých retikulocytov (IRF %, frakcia nezrelých retikulocytov).

Čo ukazujú retikulocyty v krvnom teste?

Retikulocyty sú prekurzory červených krviniek so zvyškami ribonukleovej kyseliny (RNA). V malých množstvách cirkulujú v periférnej krvi. Tieto bunky sa tvoria z normoblastov v kostnej dreni, kde zotrvávajú asi dva dni. Nezrelé červené krvinky potom vstupujú do krvi. Vplyvom hormónu erytropoetínu, ktorý sa tvorí v obličkách a uvoľňuje sa do krvi, sa z nich stávajú zrelé červené krvinky. Tento proces trvá približne dva dni.

Keď sa tvorba červených krviniek zrýchli, počet retikulocytov v krvi sa zvýši a keď sa spomalí, zníži sa. Mechanizmus nárastu retikulocytov je taký, že pri zvýšenej deštrukcii červených krviniek sa ich hladina môže prudko zvýšiť a predstavuje polovicu všetkých červených krviniek. Okrem toho sa v krvi môžu objaviť prekurzory retikulocytov, normoblasty.

Aktivita týchto buniek teda ukazuje rýchlosť tvorby červených krviniek v kostnej dreni. Retikulocytová frakcia v krvi odráža vlastnosti kostnej drene, najmä jej regeneračné schopnosti.

Čo sú a aké funkcie vykonávajú

Sú to bunky bez jadier ružovkastej farby s modrastým odtieňom. Mikroskopické vyšetrenie odhalí vnútrobunkové štruktúry, ktoré sa nenachádzajú v červených krvinkách. Sú to vláknité a zrnité útvary: mitochondrie, zvyšky RNA a iné organely.

Retikulocyty vykonávajú rovnaké funkcie ako červené krvinky, to znamená, že prenášajú kyslík, ale menej efektívne.

Norm

Miera retikulocytov sa mení s vekom: u dojčiat je ich hladina vyššia ako u dospelých. Po 12 rokoch ich počet závisí od pohlavia. Je to spôsobené nástupom menštruácie u dievčat a mesačnou stratou krvi.

Tento indikátor vo všeobecnom krvnom teste sa meria ako percento celkový početčervených krviniek (označenie - RTC). Normy retikulocytov sú uvedené v tabuľke:

Retikulocyty

Pozor! Retikulocytóza v neprítomnosti anémie naznačuje skrytú, ale dobre kompenzovanú stratu krvi.

Čo ukazujú retikulocyty a aké je ich označenie v krvnom teste?

V zdravom stave ľudského tela sú bunky retikulocytov prítomné v malom množstve. Hlavné percento retikulocytov v ľudskej kostnej dreni sa premieňa na červené krvinky. Celý tento proces transformácie netrvá dlhšie ako 2 dni. Túto premenu reguluje hormón erytropoetín.

V testoch je retikulocyt označený transkripciou RTC, on latinčina- Retikulocyty.

RTC (retikulocyty) zisťuje fungovanie kostnej drene a zaznamenáva aj úroveň produkcie červených krviniek v nej. Normoblasty sa tiež transformujú na červené krvinky.

Čo sú to retikulocyty a akú funkciu vykonávajú v tele?

Sú to bunky, ktoré nemajú modrasté alebo ružové jadro. Retikulocyty majú odlišné vnútrobunkové štruktúry, čo ich odlišuje od erytrocytov.

Tieto útvary sú pozostatkami RNA buniek, mitochondrií a vyzerajú ako vlákna alebo granule. Čím viac sa zvyšuje indikátor červených teliesok v krvi, tým vyššia je hladina retikulocytov.

A naopak – čím menej červených teliesok sa vytvorí, tým nižšia je hladina týchto molekúl.

Prekurzory červených krviniek (retikulocyty)

Svoj proces tvorby začínajú z buniek normoblastov a po 48 hodinách sa tieto molekuly stanú červenými krvinkami (nezrelými) a vstupujú do krvi.

Vplyvom hormónu (erytropoetínu), ktorý sa v tele vytvára v obličkách, sa červené krvinky premieňajú z nezrelých červených krviniek na zrelé červené krvinky.

Pri aktívnej produkcii červených krviniek sa v krvi môžu nachádzať normoblasty, ktoré sú molekulárnymi prekurzormi RTC buniek.

Funkciou retikulocytov, podobne ako erytrocytov, je transport kyslíka.

Aká je norma pre deti a dospelých?

Hladina retikulocytov v krvi človeka sa líši v závislosti od veku. U novorodencov je hladina výrazne vyššia ako u dospelých.

Do 12 rokov je pomer retikulocytov u chlapcov rovnaký ako u dievčat.

Ako dievčatá vyrastú a keď začnú menštruačný cyklus objavujú sa rozdiely v hladinách retikulocytov. Je to spôsobené stratou objemu krvi počas menštruačného cyklu.

U dospelých mužov je norma v ppm a u nežného pohlavia. RTC počas analýzy sa meria ako percento prítomnosti červených krviniek v krvi.

V tabuľke sú uvedené ukazovatele normy v percentách a v ppm:

V akých prípadoch sú predpísané krvné testy?

Retikulocytový test je predpísaný v nasledujúcich prípadoch:

Pri sledovaní liečby anémie a užívania liekov (s obsahom železa a liekov, ktoré zahŕňajú kyselinu listovú a vitamín B12;)
O chirurgická intervencia a transplantácia kostnej drene;
Ak existuje podozrenie na zničenie červených krviniek;
Monitorovať účinnosť terapie hematopoetického systému;
Po strate veľkého objemu krvi;
Krvácanie vo vnútorných životne dôležitých orgánoch;
Pri liečbe uhryznutia jedovatým hadom a malárie;
Počas transplantácie obličkových orgánov;
Ovládanie recepcie lieky erytropoetín;
Pri onkologických ochoreniach;
Metastázy v rakovinových bunkách kostnej drene.

Ako sa vykonáva diagnostický test?

Test na prítomnosť retikulocytov nie je špeciálny krvný test, ale je zahrnutý do všeobecného krvného testu.

Iba v prípade naliehavej potreby vykonať špecializovanú štúdiu zloženia krvi pre retikulocyty sa vykoná ďalšia diagnostika.

Podstatou tejto diagnostickej metódy je identifikácia buniek, ktoré majú zrnitú látku a ktorá je zafarbená pomocou špeciálnych farbív.

Táto látka je určená krvným náterom. Na vykonanie tohto testu sa odoberie krv z prsta.

Existuje niekoľko spôsobov, ako vykonať výskum:

Na laboratórnom skle;
V laboratórnej skúmavke.

Metóda analýzy na skle je široko používaná metóda v laboratóriách Invitro, hoci táto metóda nie je dostatočne presná.

Na túto analýzu je potrebné použiť špeciálne farbivo, laboratórne sklo a mikroskop. Táto metóda overovania je najlacnejšia a najdostupnejšia.

Pri použití horáka je potrebné sklo dobre umyť a vysušiť. Farbivo musíte naniesť na teplý povrch a urobiť ním šmuhu na skle. Potom naneste kvapku krvi na tento náter a tiež z neho urobte náter. Pohár s náterom umiestnite na 10 minút do vlhkého prostredia a potom vysušte na vzduchu.

Metóda výskumu skúmavky. Táto technika sa mierne líši od techniky analýzy skla. Podstatou tejto techniky je, že musíte do skúmavky umiestniť farbivo a potom doň pridať kvapku krvi a premiešať. Táto kompozícia by mala stáť od 20 minút do 180 minút. Potom znova premiešajte a až potom aplikujte ťahy.

Diagnostika sa vykonáva aj pomocou automatizovanej analýzy. Táto technika je oveľa zložitejšia ako predchádzajúca technika, ale umožňuje presnejšie vyšetrenie krvi. Pri tejto technike sa používa iba venózna krv a najneskôr do 10 hodín po odbere. Pomocou tejto metódy sa stanovia retikulocyty s nízkou fluorescenciou - LFR, strednou - MFR a vysokou fluorescenciou - HFR.

Počítanie hladiny retikulocytov v krvi

Šmuhy, ktoré prešli celým procesom sušenia, sa skúmajú pomocou mikroskopu. Erytrocyty, podobne ako retikulocyty, majú granulárnu štruktúru.

Žltá farba a zelenkastý odtieň;
Retikulocyty sú modrej farby a majú fialový alebo ružový odtieň.

Počet buniek sa vypočíta v ppm alebo ako percento z 1000 červených krviniek. Ak krvný náter odhalí retikuly v množstve 17 buniek, potom je výpočet 17 ppm alebo 1,7%.

Hotové nátery sa skúmajú pod mikroskopom. Červené krvinky a retikulocyty majú žltkasto zelenkastú farbu, zrnitá štruktúra retikulocytov je modrá alebo modrofialová. Spočítané bunky sú vyjadrené v ppm alebo percentách.

V prípade anémie je vhodné použiť „index produkcie retikulocytov“, ktorý udáva hematokrit a počet dní, počas ktorých sa retikulocyty dostanú do krvi.

Zvýšená hladina retikulocytov v krvi, čo to znamená?

U novorodenca sú retikulocyty zvýšené a zodpovedajú 5% - 10%. Tento koeficient je pre dieťa v tomto veku normou a je to spôsobené tým, že sa bábätko prispôsobuje vplyvom vonkajšieho prostredia.

Ako deti starnú, indikátor klesá na štandardnú zhodu.

U dospelých dochádza k zvýšeniu retikulocytov v dôsledku choroby - retikulocytózy. K tomuto procesu dochádza preto, že v krvi je nedostatok červených krviniek a kostná dreň tieto bunky dopĺňa produkciou retikulocytov, ktoré sa najneskôr do 48 hodín syntetizujú na červené krvinky.

Ak je človek zdravý, potom červené krvinky v jeho krvi žijú 120 kalendárnych dní, čo umožňuje kostnej dreni včas doplniť ich hladinu.

Zvýšené retikulocyty v krvi môžu mať pozitívny vplyv na telo aj negatívne na človeka.

Retikulocyty

Počet retikulocytov sa určuje mikroskopiou špeciálne zafarbených náterov

3.2.1 Spôsob farbenia krvných náterov na retikulocyty podľa Alekseeva (počítanie podľa Fonia)

Činidlo: pracovný roztok farby podľa Alekseeva

Štandardná hodnota: Krv zdravého človeka obsahuje 0,2-1,0 %

(alebo 2-10 dokonca povolených až do 12 ppm) retikulocytov

Klinický a diagnostický význam: Výskyt retikulocytov v periférnej krvi svedčí o zvýšenej funkcii kostnej drene a využíva sa pri hodnotení rôznych typov anémie.

Zvýšenie počtu retikulocytov sa pozoruje po strate krvi s hemolytickou anémiou

Ťažká retikulocytóza - pozorovaná pri hemolytickej žltačke

Zníženie počtu retikulocytov v prítomnosti anémie naznačuje aplastický typ hematopoézy.

Podľa hladiny retikulocytov v krvi sa anémia delí na:

Regeneračné (počet retikulocytov je 0,5-5% - ide o posthemoragickú anémiu);

Hyperregeneratívne (počet retikulocytov viac ako 5% je hemolytická anémia);

Hypo- a aregeneratívne (počet retikulocytov je znížený alebo chýbajú, napriek ťažkej anémii - hypo- a aplastická anémia s nedostatkom železa a B12).

Počítanie retikulocytov v nátere po ich zafarbení špeciálnymi farbivami

Princíp metódy

Detekcia granulárno-retikulárnej substancie retikulocytov pri supravitálnom farbení alkalickými farbami s ich ďalším počítaním v krvnom nátere.

Činidlá

Môžete použiť jedno z nasledujúcich farbív:

Nasýtený roztok brilantnej kresylovej modrej v absolútnom alkohole (na prípravu absolútneho alkoholu je potrebné namočiť 96% etanol v niekoľkých výmenách prášku kalcinovaného síranu meďnatého). Na 100 ml absolútneho alkoholu vezmite 1,2 g farby.
Roztok azúru I: azúr I – 1 g, šťavelan amónny – 0,4 g, chlorid sodný – 0,8 g, etylalkohol 96 % – 10 ml, destilovaná voda – 90 ml. Roztok farby v uzavretej fľaši sa umiestni do termostatu pri 37 °C na 2–3 dni a pravidelne sa intenzívne pretrepáva. Potom sa ochladí na teplotu miestnosti a prefiltruje sa cez papierový filter. Roztok sa uchováva v nádobe z tmavého skla. Ak sa objaví sediment, farba by sa mala znova prefiltrovať.
Roztok Azur II: Azur II – 1 g, citrát sodný – 5 g, chlorid sodný – 0,4 g, destilovaná voda – 45 ml. Roztok sa nechá 2 dni v termostate pri 37 °C za občasného miešania. Na urýchlenie rozpúšťania je možné farbu zohrievať na miernom ohni 15 - 20 minút bez privedenia do varu. Ochlaďte na teplotu miestnosti a prefiltrujte. Skladujte v nádobách z tmavého skla.

Špeciálne vybavenie

Pokrok v odhodlaní

Farbenie retikulocytov sa vykonáva buď na skle alebo v skúmavke.

Farbenie retikulocytov na skle

Farbenie retikulocytov in vitro

Farbenie retikulocytov v skúmavke sa líši pri použití rôznych farbív.

Metóda 1 – farbenie retikulocytov v skúmavke brilantnou kresylovou modrou.

Metóda 2 - farbenie retikulocytov v skúmavke s Azur II.

Do skúmavky sa vloží 0,05 ml roztoku farbiva azure II a 0,2 ml krvi. Zmes sa dôkladne premieša a nechá sa 20 - 30 minút. Znova premiešajte a pripravte tenké maznice.

Metóda 3 - farbenie retikulocytov v skúmavke s Azure I.

V súčasnosti sú komerčne dostupné hotové, továrensky vyrobené farbivá pre retikulocyty. Retikulocyty sa s nimi farbia podľa priložených pokynov.

Počet retikulocytov.

Fotografie retikulocytov:

Počet spočítaných retikulocytov je vyjadrený na 100 (v percentách) alebo na 1000 (v ppm) červených krviniek.

Príklad: Pri spočítaní 1 000 červených krviniek v nátere sa zistilo, že 15 červených krviniek z 1 000 má zrnitú sieťovinu rôzneho stupňa, to znamená, že ide o retikulocyty. Preto je počet retikulocytov v tomto prípade 1,5% alebo 15‰.

Literatúra:

Adresár "Laboratórne metódy výskumu na klinike" editoval Menshikov V.V. - Moskva, "Medicína", 1987
Lyubina A. Ya., Ilyicheva L. P. a spoluautori - „Klinické laboratórne štúdie“ - Moskva, „Medicína“, 1984.

Počet retikulocytov pomocou fluorescenčnej mikroskopie

Retikulocyty

Patologické inklúzie v červených krvinkách

Cytochemické štúdium lipidov

Analýza moču podľa Nechiporenka

Retikulocyty: čo sú, normy pre deti a dospelých, vysoké a nízke, úloha v tele

Vo všeobecnom krvnom teste môžete často nájsť také označenia buniek ako RET - retikulocyty. V plnom zmysle slova to nie sú bunky, keďže nemajú jadro, rovnako ako zrelé červené krvinky. Medzitým určenie týchto foriem nie je zahrnuté v zozname povinných ukazovateľov hematologického výskumu. Ak to lekár potrebuje, osobitne zdôrazní parametre, ktoré ho zaujímajú. Samozrejme, ľudia, ktorí museli podstúpiť takúto analýzu, chcú vedieť, aké sú to bunky - retikulocyty a prečo sa s nimi zaobchádza tak nejednoznačne.

Kto sú a koľko ich je?

Retikulocyty sú „novo vytvorené“ červené krvinky, ktoré práve opustili kostnú dreň.

Miera retikulocytov v periférnej krvi dospelého človeka sotva presahuje 1 % (podľa rôznych autorov od 0,8 – 1,3 do 0,2 – 2 %). U detí, ktoré sa práve narodili, môže byť norma 10%, ale ako dieťa rastie a vyvíja sa, ukazovatele sa začínajú znižovať a do dvoch týždňov života sú čo najbližšie k normálnym hodnotám dospelých.

Vo všeobecnosti je erytropoéza u novorodencov samostatnou témou: test vykonaný 12 hodín po pôrode ukazuje výrazné zvýšenie hladiny hemoglobínu (až 200 g/l), červených krviniek (až 6,0 h/l a viac) a retikulocyty. Tento krvný obraz sa pozoruje niekoľko dní, potom tieto ukazovatele začnú klesať, čo súvisí s poklesom produkcie erytropoetínu. Po dvoch týždňoch až mesiaci sa produkcia erytropoetínu opäť zvýši, čo vedie k zvýšeniu hladiny retikulocytov a normalizuje sa erytropoéza (u šesťmesačného dieťaťa sa už normy veľmi nelíšia od dospelých). V tejto súvislosti by som chcel upriamiť pozornosť čitateľa na označenie jednotiek na meranie počtu retikulocytov; ich obsah možno vyjadriť v ppm, potom sa čísla zvýšia 10-krát.

Tabuľka: normy retikulocytov podľa veku

Vek „do jedného roka“ však zahŕňa rôzne obdobia, ktoré sú pre telo dieťaťa veľmi dôležité. Okrem toho by bolo užitočné vziať do úvahy názory rôznych autorov, ktorí zvažujú iné možnosti, kde sú normy pre deti napísané doslova podľa dňa a mesiaca, a preto sa trochu líšia od predchádzajúcich hodnôt. V normách dospelých je badateľný rozdiel.

Je na pacientovi, aby si vybral, ktorej tabuľke bude veriť, aj keď v rôznych zdrojoch ich možno nájsť niekoľko ďalších; v pochybných prípadoch by však nebolo na škodu opýtať sa laboratória, akou metódou bol výpočet vykonaný (mikroskopia alebo automatický analyzátor). a aké referenčné hodnoty laboratórium používa.

Prečo je ich tak málo a aká je ich úloha?

Predchodcom červených krviniek erytroidného radu je bunka, ktorá neobsahuje hemoglobín, no napriek tomu má jadro, ako sa na skutočnú bunku patrí, erytroblast, ktorý normálnych podmienkach sa transformuje na bazofilný erytroblast (pronormoblast, kde sú už viditeľné prvé známky hemoglobinizácie (polychromatofilné štádium).

Ak je s krvotvorbou všetko v poriadku a podmienky zodpovedajú fyziologickým, tak budúci erytrocyt prechádza štádiami pronormoblastu a normoblastu (predstavuje konečnú fázu vývoja erytrocytov, kedy má ešte jadro). Pri ďalšom dozrievaní bunky dochádza k involúcii jadra a ďalší predchodca, polychromatofilný normocyt, ho stále stráca a mení sa na mladý normocyt nazývaný retikulocyt. Retikulocyty už nemajú jadro, ale obsahujú hemoglobín a majú schopnosť transportovať kyslík a oxid uhličitý.

Medzi indikátory patria retikulocyty všeobecná analýza krvi, ale hľadajú sa len v prípadoch, keď je potrebné študovať intenzita erytropoézy. Počítanie počtu červených krviniek sa vykonáva v 1 000 červených krvinkách a jeho cieľom je určiť rýchlosť tvorby červených krviniek v kostnej dreni: pri zrýchlenej produkcii sa počet retikulocytov zvyšuje, pri inhibícii klesá . Prudko zrýchlená erytropoéza môže viesť k tomu, že nielen retikulocyty, ale aj ich prekurzory – normoblasty – vychádzajú z kostnej drene vo väčšom množstve, ako je potrebné. Prečo ich však nemožno spočítať ako iné bunky počas klinického krvného testu?

Vyžadujú samostatné lakovanie

Červené krvinky po strate jadra vnímajú len kyslé farbivá a svetelná mikroskopia v nich neodhalí žiadne vnútrobunkové štruktúry, ktoré umožňujú zaradiť vzniknuté prvky medzi mladé alebo zrelé druhy. Pomocou špeciálnych metód farbenia však možno nájsť retikulocyty. Supravitálne farbenie brilantnou krezylovou modrou alebo akridínovou oranžovou, odhaľujúce bazofilnú substanciu - zrnité alebo vláknité útvary, pomáha izolovať mladé formy - retikulocyty - z celkovej hmoty (1000 buniek) červených krviniek v nátere.

Medzitým, keď majú v cytoplazme sieťovú látku charakteristickú pre retikulocyty, ktorá určuje názov buniek (substantia reticulofilamentosa), nie všetky sú „rovnaké z tváre“, preto sú rozdelené do 5 skupín, z ktorých každá má jeho vlastné charakteristiky umiestnenia bazofilnej látky (BS):

Krátkodobá „mladosť“

V periférnej krvi zdravých dospelých, ktorí patria najmä do skupín 4 a 5 (83 %), necirkuluje viac ako 1 % mladých červených krviniek. Retikulocytov skupín 3 a 4 je podstatne menej, spolu tvoria asi 18 % a skupina 1 (jadrové bunky) sa vo všeobecnosti objavuje len v prípade zvýšenej regenerácie.

Červené krvinky sú v " v mladom veku„a krátkodobo sa nazývajú retikulocyty: 30 - 40 hodín z prideleného obdobia neopúšťajú strómu kostnej drene, vytvárajú si tam určitú zásobu červenej krvi a po odchode, ktorý je regulovaný najmä humorálnym glykoproteínovým hormónom erytropoetín, voľne prechádzajú krvnými cievami 35 - 45 hodín. V periférnej krvi sa retikulocyty konečne rozlúčia so svojou „mladosťou“ - stratia retikulum a sú poslané vykonávať hlavné funkcie dospelej bunky, ktorú, ako je uvedené vyššie, možno len ťažko nazvať bunkou - nemá jadra ("bunkové deriváty").

Potrebný počet retikulocytov!

Za určitých okolností sa zvyšuje produkcia červených krviniek v kostnej dreni, preto sa zvyšuje uvoľňovanie mladých foriem do krvného obehu alebo naopak inhibícia krvotvorby brzdí uvoľňovanie retikulocytov a následne sa ich počet v krvi znižuje . Pokus zhodnotiť účinnosť erytropoézy zvyčajne začína počtom červených krviniek čerstvo uvoľnených z kostnej drene.

Použitie označenia RET v klinickej analýze je tiež vyvolané podozrením na zvýšenú deštrukciu červených krviniek v krvi (hemolýza). Pri zistení príčiny deštrukcie buniek však vyvstáva otázka: ako kostná dreň reaguje na takéto udalosti, snaží sa kompenzovať straty mladými formami alebo zostáva ľahostajná? Okrem toho zvýšené (alebo znížené) mladé červené krvinky môžu informovať o správaní kostnej drene za iných okolností:

Aplikácia lieky ovplyvňujúce fungovanie hlavného hematopoetického orgánu (doplnky železa, vitamínová terapia B 12 a kyselina listová);
liečba erytropoetínom, o ktorom je známe, že kontroluje uvoľňovanie retikulocytov z kostnej drene);
Stav kostnej drene po transplantácii darcovského orgánu.

Retikulocyty sú zvýšené - čo to znamená?

Zvýšené hodnoty obsahu mladých foriem v populácii erytrocytových buniek môžu naznačovať prítomnosť rôznych patologické procesy a reakcie kostnej drene na ich prítomnosť:

Je nepravdepodobné, že by strata krvi, najmä masívna, neprinútila zdravý mozog k intenzívnej práci – veď straty treba čo najskôr doplniť, takže počet retikulocytov sa môže zvýšiť na 10 – 12 % (‰ alebo 100 - 120 retikulocytov na 1 000 červených krviniek - 1/10).
Deštrukcia červených krviniek v dôsledku vniknutia hemolytických jedov alebo v dôsledku iných okolností tiež nenechá kostnú dreň „ľahostajnou“ - zvýšený rozpad zrelých červených krviniek určite zvýši podiel mladých foriem (niekedy môže tento podiel dosiahnuť 50 %).
Také závažné ochorenie, ako je hemolytická anémia, ktorá vedie k zvýšeniu RET až o 300%, nezostane bez povšimnutia, to znamená, že už nie je potrebné hľadať retikulocyty v erytrocytoch, ale naopak, pretože všetky formy budú byť mladý a dospelí budú mať čas sa rozbiť.
Retikulocytózu sprevádzajú aj iné hematologické patológie (polycytémia, talasémia), ako aj metastázy do kostnej drene neoplázií rôznych lokalizácií.
Hodnoty retikulocytov sa zvýšia v prípade akútnej hypoxie (hladovanie kyslíkom) v dôsledku rôznych okolností, ktoré môžu človeka prenasledovať od narodenia až po starobu.
Infekcie, ako je malária, môžu spôsobiť zvýšený počet mladých buniek.
Retikulocytóza sa pozoruje s účinnú liečbu doplnky železa pre IDA (po 1-2 týždňoch), je možný skok na 200 % (retikulocytová kríza) približne týždeň od začiatku terapeutických opatrení v prípade anémie z nedostatku B 12-folátu.

Málo alebo nie

Pokles hladiny retikulocytov sa pozoruje pri potlačení erytrocytovej línie hematopoézy a znížení tvorby plnohodnotných erytrocytov z rôznych dôvodov, z ktorých možno rozlíšiť:

Aplastická anémia, pri ktorej sú postihnuté všetky línie hematopoézy;
Ochorenia obličiek, ktoré inhibujú syntézu erytropoetínu, ktorý je potrebný na reguláciu uvoľňovania mladých buniek z kostnej drene;
Autoimunitné hematologické ochorenia;
Nedostatok vitamínu B 12 a kyseliny listovej, ktorá má veľmi negatívny vplyv na funkciu kostnej drene, keďže je potrebná pre dozrievanie buniek. V tomto prípade sa vývoj zastaví na úrovni erytroblastu: bunky sú veľké, krehké, preto nie sú plastické a nemajú schopnosť presakovať do úzkych kapilár (megaloblastická anémia);
Alkoholizmus (aký druh obnovy krvi existuje?);
myxedém;
Metastázy novotvarov do kostrového systému.

Konečne

Vyhľadávanie a počítanie retikulocytov sa vykonáva v 1000 červených krvinkách, preto ide o všeobecný krvný test. Ak je v človeku všetko normálne, potom nemá zmysel robiť samostatné škvrny a hľadať mladé formy, ktoré v takýchto prípadoch nenesú žiadne informácie. Iná vec je, ak existujú podozrenia, že s líniou erytrocytov nie je niečo v poriadku – vtedy môžu tieto bunky do istej miery objasniť situáciu.

V iných prípadoch, keď túto štúdiu vnímajú ako samostatnú, sa ľudia pýtajú, ako sa pripraviť na analýzu, aby získali spoľahlivý výsledok. Tradične sa OAC podáva nalačno, na retikulocyty, a to nie je dôležité, takže sa netreba báť. Okrem toho, ak sa na analýzu odoberie venózna krv alebo sa test vykoná na vysokokvalitnom automatickom analyzátore, nebudete musieť navštíviť laboratórium druhýkrát. Všetko bude zaznamenané vo všeobecnom krvnom teste.

Prečo môžu byť retikulocyty zvýšené? Normálne hodnoty

Retikulocyty sú v podstate nezrelé červené krvinky uvoľnené z kostnej drene do krvného obehu. Bunky neustále cirkulujú v krvi, ale v zdravom tele je ich pomer s ostatnými formovanými prvkami konštantný. Počet retikulocytov sa môže meniť v závislosti od objemu krvi a potreby nových červených krviniek, pri nádoroch kostnej drene a chronických ochoreniach, ako aj v dôsledku fyziologickej adaptácie. U detí normálny indikátor RET% je vždy vyššie ako u dospelých.

Čo sú to retikulocyty, ich typy a funkcie

Retikulocyty (akceptované označenie v testoch je RET) sú mladou formou červených krviniek – nie úplne zrelých červených krviniek, ale schopných prenášať kyslík. Pod mikroskopom je vo vnútri retikulocytu viditeľný zrnitý-sieťový útvar (lat. sietnica - sieť), vďaka ktorému dostali svoje meno. Údaje RET% charakterizujú aktivitu kostnej drene vo vzťahu k tvorbe červených krviniek.

Podľa stupňa ich zrelosti sa rozlišuje 5 typov (alebo skupín) retikulocytov:

Erytronormoblasty majú vytvorené jadro a zrnitosť, ktorá ho obklopuje vo forme hustej koruny.
Neexistuje žiadne jadro, iba formácia zrnitého pletiva.
Látka je zrnitá, pripomínajúca hustú sieť.
Útvar v strede bunky pripomína jednotlivé vlákna.
Retikulocyty obsahujú jednotlivé granuly.

Až 80 % všetkých retikulocytov je v skupinách 4-5. Všetky retikulocyty majú určité množstvo hemoglobínu, takže ich funkciou je transport kyslíka a odstraňovanie oxidu uhličitého. Za normálnych podmienok sa retikulocyt zmení na zrelú červenú krvinku asi za 2 dni.

Normálne každá červená krvinka existuje asi 120 dní, potom „staré“ bunky vstupujú do sleziny, kde sa ich cesta končí. Slezina sa podľa jednej zo svojich funkcií nazýva cintorín červených krviniek. Telo sa snaží obnoviť rovnováhu a vplyvom hormónu erytropoetínu (produkovaného v obličkách) sa aktivuje kostná dreň a produkuje nové retikulocyty. Akonáhle sa doplní dostatočný počet červených krviniek, obličky znížia produkciu erytropoetínu a inhibujú erytropoézu (tvorbu červených krviniek).

Normy

Za normu sa považuje 0,2 - 1% retikulocytov v periférnej krvi. U novorodencov je miera RET 5-10%, ale potom klesá. Ženy v dôsledku periodickej straty krvi a obnovy objemu krvi majú viac retikulocytov ako muži.

Množstvo RET je u zdravých ľudí stabilné. Ak klesne celkový počet červených krviniek alebo sa zníži hematokrit, potom môžu byť percentuálne údaje pre retikulocyty nadhodnotené. Na adekvátne posúdenie závažnosti anémie sa používa index retikulocytov, ktorý určuje absolútny obsah RET. Výpočet je založený na vzorci: RET% x hematokrit/45x1,85. Ak je index menší ako 2, potom sa potvrdí pokles tvorby červených krviniek; index viac ako 2-3 naznačuje nedávno zvýšenú aktivitu kostnej drene.

Dôvody zvýšenia hematokritu v krvi nájdete v tomto článku.

Absolútny počet retikulocytov (RET#):

Príčiny zvýšeného počtu retikulocytov (retikulocytóza)

Hemolýza, deštrukcia červených krviniek. Možné dôvody hemolýza - expozícia hemotoxínom (zmije, toxíny malárie, niektoré lieky na liečbu ertrémie) a autoimunitné reakcie proti červeným krvinkám. V prípade masívnej smrti červených krviniek môže indikátor RET prekročiť normu o 300%.
Krvácajúca. Pre odlišná diagnóza RET% sa používa v dynamike: pri nedávnej akútnej strate krvi sa počet retikulocytov zvyšuje po 3-4 dňoch, pri chronickej strate krvi bude hladina RET trvalo vysoká.
Zápalové procesy, nádory alebo metastázy v kostnej dreni zvyšujú RET%.
Obdobie zotavenia po ožarovaní alebo chemoterapii.
Pri liečbe anémie prípravkami železa sa RET% zvyšuje na 8.-12. deň, kedy sú predpísané adekvátne dávky vit. B12 – v dňoch 5.-8. V oboch prípadoch je indikátorom účinnosti terapie retikulocytóza.
Polycytémia akéhokoľvek pôvodu (spolu so zvýšením množstva hemoglobínu a hladiny hematokritu).
Užívanie erytropoetínu na stimuláciu kostnej drene na anémiu.
Užívanie antipyretických liekov a levodopy.
Fajčenie.
Pri stúpaní do výšky - prispôsobenie sa nízkemu obsahu kyslíka vo vzduchu.
Počas tehotenstva.

Charakteristická je falošná retikulocytóza (zvýšené RET len v krvi). rakovinové nádory a metastázy do kostnej drene.

Na zistenie dôvodu zvýšenia RET sa vykonáva dodatočný výskum: izolované údaje nehrajú veľkú úlohu.

Dôsledky a liečba retikulocytózy

Následky zvýšenia RET sú: zvýšenie hematokritu, počtu červených krviniek a viskozity krvi. Existuje vysoké riziko vzniku trombózy a zablokovania lúmenu krvných ciev v mozgu, srdci, dolných končatín. Výsledkom môže byť infarkt myokardu, cievna mozgová príhoda, pľúcna embólia, smrť mäkkých tkanív nôh. Všetky tieto stavy sú život ohrozujúce a vyžadujú si okamžitú liečbu.

Pri akútnej strate krvi sa používa transfúzia celej krvi alebo jej zložiek (plazma, červené krvinky a krvné doštičky). Pri chronickom krvácaní v gastrointestinálny trakt, pri cirhóze pečene liečia základné ochorenie alebo podstupujú chirurgickú liečbu.
Toxické účinky: infúzna terapia, protilátky. Pre autoimunitné reakcie - plazmaferéza.
Nádory a metastázy v kostnej dreni: používa sa ožarovanie a chemoterapia. Pre polycytémiu - prekrvenie, medikamentózna terapia, transplantácia kostnej drene.

Príčiny nízkeho počtu retikulocytov, liečba

RET sa znižuje, ak je inhibovaná erytropoéza, tvorba červených krviniek, čo naznačuje zhoršenú funkciu kostnej drene a anémiu. Hlavné dôvody:

anémia (nedostatok železa, B12 a folátu);
znížená funkcia štítna žľaza- myxedém;
ochorenie obličiek vedúce k zníženej produkcii erytropoetínu;
aplastická anémia s konštantnou znížená hladina retikulocyty - život ohrozujúci stav;
ožarovanie alebo chemoterapia, ktorá utláča kostnú dreň;
nádory alebo metastázy v kostnej dreni;
alkoholizmus, čo vedie k narušeniu funkcie obličiek a pečene;
chronické infekčné choroby;
lieky – chloramfenikol, karbamazepín, sulfónamidy;
urémia - zvýšenie obsahu dusíkatých látok v krvi počas zlyhanie obličiek.

Taktika liečby na zníženie počtu retikulocytov sa určuje po diagnostikovaní základnej choroby. Spočiatku sa na zmiernenie stavu pacienta používa symptomatická liečba - úľava od bolesti, infúzna detoxikácia a v prípade potreby plazmaferéza. Po stanovení konečnej diagnózy prechádzajú na etiologickú (vplyv na príčinu ochorenia) a patogenetickú (vplyv na mechanizmy rozvoja ochorenia) liečbu.

posúdenie počtu retikulocytov pomôže posúdiť primeranosť liečby určitých typov anémie alebo indikovať úroveň aktivity erytropoézy;
Množstvo RET nemá nezávislý význam pre stanovenie diagnózy, sú potrebné ďalšie vyšetrenia.

Dôvody zvýšenia retikulocytov, ako určiť funkčnosť hematopoetického systému?

Niekedy pri predpisovaní klinického vyšetrenia môže všeobecný krvný test samostatne indikovať RTC alebo RET - skratky, ktoré označujú obsah retikulocytov. Sú to bezjadrové bunky, ktoré v procese ich tvorby predchádzajú erytrocytom (červeným krvinkám). Retikulocyty v krvnom teste, ich počet a pomer s červenými krvinkami odzrkadľujú stav a reprodukčnú funkčnosť kostnej drene, ako aj celého krvotvorného systému.

Lekársky certifikát

Týmto spôsobom môžete podrobne definovať, čo sú retikulocyty: sú to bunky okrúhleho alebo hviezdicovitého tvaru, ktoré sa tvoria v kostnej dreni a vplyvom glykoproteínového hormónu erytropoetínu sa transformujú na červené krvinky.

Farba retikulocytov je zvyčajne ružová s modrým odtieňom. Ich charakteristickým znakom od neskoršej formy je prítomnosť v štruktúre zvyškovej RNA, mitochondrií a iných organel, ktoré vyzerajú ako granulárne a vláknité útvary, ktorých strata naznačuje transformáciu na zrelú bunku.

Funkčné povinnosti retikulocytov sa zhodujú s erytrocytmi - prenášať kyslík, ale s oveľa menšou účinnosťou v dôsledku nízkeho obsahu hemoglobínu v nich. Sústreďujú sa najmä v červenej kostnej dreni, plochých a tubulárne kosti a do krvi vstupujú iba zrelé červené krvinky. Ale malá časť nezrelých retikulocytov je povolená aj v periférnom krvnom obehu, čo naznačuje aktiváciu procesu tvorby červených krviniek (erytropoéza).

Proces tvorby krvi

Erytropoéza začína premenou erytroblastu, bunky obsahujúcej jadro, ale bez hemoglobínu, na pronormblast. Ďalej sa v erytroidnej sérii vytvára bazofilný erytroblast, ktorý už má predpoklady na hemoglobinizáciu.

Keďže progenitory červených krviniek akumulujú látku, ktorá zadržiava kyslík (hemoglobín), bunka prechádza štádiami polychromatofilného a potom oxyfilného normoblastu. V tomto období je ešte zachované jadro, ktorého involúcia vedie k vytvoreniu priamo mladého erytrocytu – retikulocytu, ktorý už má schopnosť zadržiavať a transportovať kyslík a oxid uhličitý.

Mladé červené krvinky zostávajú na mieste svojho vzniku až 40 hodín, potom sa malá časť z nich pod vplyvom erytropoetínu dostane do cievy, kde sa voľne pohybuje 1,5 alebo 2 dni. Počas tejto doby bunka stráca retikulum (zvyškové nitkovité útvary) a mení sa na erytrocyt.

Etapy vývoja retikulocytov

V krvi prechádzajú retikulocyty piatimi štádiami dozrievania, keď sa retikulum involuje:

štádium nula - keď má bazofilná látka (sieťová intracelulárna látka) tvar jadra, to znamená, že akumulácia zrnitosti vyzerá ako druh koruny;
prvé štádium – bazofilná látka (BS) získava sieťovú štruktúru vo forme guľôčky;
druhý stupeň – zrnitá sieť je rovnomerne rozložená po celej bunke;
tretia etapa - BV vyzerá ako samostatné vlákna;
štvrté štádium – BV je distribuovaný po obvode bunky vo forme malých zŕn.

V zdravom tele by sa retikulocyty v krvnom obehu mali nachádzať iba v štádiách III a IV dozrievania (80 percent) a 0 - II v jednotlivých kópiách. Ale nadmerná smrť červených krviniek alebo hladovanie kyslíkom stimuluje zvýšenú produkciu erytropoetínu v obličkách, čo vedie k uvoľňovaniu nezrelých buniek všetkých štádií a dokonca aj normoblastov do ciev.

Krvný test na retikulocyty

Počítanie retikulocytov v krvnom nátere nie je potrebné na hematologické vyšetrenie, ale je súčasťou všeobecnej klinickej analýzy. Iba v prípade, že sa vyskytnú určité podozrenia, lekár urobí v analýze špeciálne označenie.

Dôvody na štúdium

Dôvodom na testovanie množstva RTC v krvi je kontrola funkcie kostnej drene a obličiek pri produkcii krviniek a erytropoetínu v týchto prípadoch:

ak máte podozrenie na anémiu rôzneho pôvodu;
v prípade potreby kontrolná lieková terapia na nedostatok železa, vitamínu B12 a kyseliny listovej;
na monitorovanie pri užívaní liekov obsahujúcich erytropoetín, erytrosupresorov;
v prípade závažného vonkajšieho krvácania alebo podozrenia na vnútorné krvácanie;
kvôli potrebe užívať lieky, ktoré neutralizujú toxíny vznikajúce pri uhryznutí jedovatým hmyzom alebo hadmi;
na kontrolu tvorby červených krviniek počas transplantácie kostnej drene alebo obličky;
určiť rakovinu.

Posledný bod súvisí s charakteristikou metastázovania niektorých rakovinových nádorov do krvotvorných orgánov.

Spôsob detekcie

Ak dôjde k strate jadra, na krvinky sú použiteľné metódy farbenia iba kyslými farbivami. Tónovaním krvného náteru sú indikované prvky erytroidnej série, ktoré sa potom detegujú pomocou svetelnej mikroskopie. Na izoláciu retikulocytov z celkovej hmoty červených krviniek je potrebné použiť špeciálne prípravky, ktoré menia farbu zrnitej štruktúry buniek.

Samotný proces identifikácie pozostáva z miešania krvná plazma s brilantnou krezylovou modrou alebo akridínovým oranžovým farbivom in vitro (in vitro) alebo na skle v pomere: 1 diel krvi na 10 dielov látky.

Metódy na skle a in vitro sú zásadne odlišné. V prvom prípade sa zmiešané krvné nátery s farbivom ponoria na 10 minút do vlhkého prostredia, potom sa vysušia a bunky sa spočítajú pod mikroskopom. Pri druhej možnosti sa kompozícia zmiešaná v skúmavke nechá až 3 hodiny, potom sa znova premieša, urobí sa náter a spočíta sa.

Keď sa hviezdicové bunky retikulocytov stanú rozlíšiteľnými a určí sa stupeň ich zrelosti (podľa štruktúry tónovanej BV), možno získať informácie o stave kostnej drene.

Prijateľné ukazovatele

Normálna hladina retikulocytov zodpovedá procesu tvorby krvi v zdravom tele. Na usporiadanie údajov sa používa špeciálna tabuľka, v ktorej sú normálne rozsahy odstupňované podľa veku a pohlavia osoby.

Norma retikulocytov v krvi detí

Norma retikulocytov u detí sa líši v závislosti od konkrétneho obdobia tvorby hematopoetického systému. U novorodencov do 14 dní je teda prípustná miera od 0,15 do 1,5 percenta vo vzťahu k červeným krvinkám. Normálne hodnoty pre dojčatá do dvoch mesiacov - od 0,45 do 2,1 percenta a do šiestich mesiacov - 0,25 - 0,9 percenta. U dieťaťa od šiestich mesiacov do jedného roka sa hodnoty od 0,2 do 1 percenta považujú za zdravé a stabilizujú sa do šesť rokov veku. Ďalej sa rozsah zužuje: od 7 do 12 rokov sa pohybuje od 0,2 do 1,3 percenta.

Retikulocyty v krvi dospelých

Ďalší prípustný obsah retikulocytov v krvi závisí viac od pohlavia dieťaťa ako od veku a zodpovedá ukazovateľom dospelých. Je to spôsobené začiatkom menštruačného cyklu u dievčat, čo znamená mesačnú stratu krvi, a teda zvýšenie produkcie krviniek počas tohto obdobia. Štandardné ukazovatele:

prípustná hladina mladých červených krviniek v krvi žien a mladých dievčat od 13 rokov bude od 0,12 do 2,05 percenta (od 1,2 do 20 ppm v uvedenom poradí);
Normálny počet retikulocytov u mužov sa pohybuje od 0,24 do 1,7 percenta celkovej erytroidnej hmoty.

Tak sa u dospelého človeka nastaví konštantný rozsah prípustnej koncentrácie mladých krviniek, ktoré obsahujú látku zrnitého pletiva. V tomto prípade zvýšené rekulocyty alebo retikulocytová kríza naznačujú určité poruchy vo fungovaní hematopoetického systému.

Zvýšené retikulocyty

Zvýšené retikulocyty (alebo inak retikulocytóza) môžu mať pre subjekt pozitívne aj negatívne dôsledky. Zvýšený počet nezrelých krviniek sa vyskytuje v nasledujúcich prípadoch:

O pozitívne výsledky terapia doplnkami železa, vitamínom B12 a kyselinou listovou, ktorá sa zvyčajne vyskytuje do týždňa.
Pri dopĺňaní objemu krvi po výraznej strate krvi.
S pozitívnymi výsledkami liečby onkologických ochorení protinádorovými liekmi alebo rádioterapiou.

Dôležité! Retikulocytóza sa pozoruje s nedostatkom kyslíka vo významnej nadmorskej výške.

Negatívne hodnoty retikulocytózy zahŕňajú:

Následky chorôb ako napr brušný týfus ktoré vyvolávajú vnútorné krvácanie.
Retikulocyty sa zvyšujú pri intoxikácii chemickými jedmi alebo cudzími látkami.
Falošná retikulocytóza ukazuje prítomnosť nezrelých buniek v krvi v neprítomnosti v kostnej dreni, čo naznačuje zápalové procesy alebo metastázy v orgáne.
Retikulocytóza sa pozoruje pri malárii, hemolytickej anémii alebo talasémii.

Zvýšený obsah nezrelých krviniek v krvi (retikulocytóza) je spojený so zhrubnutím, ktoré môže následne viesť k trombóze, infarktu alebo mozgovej príhode.

Retikulocyty v krvi počas tehotenstva

U tehotných žien sa celkový objem krvi zvyšuje v dôsledku plazmy, takže sa pozoruje jej zriedenie a zníženie hladiny červených krviniek. Vzhľadom na to, že v krvi nie je dostatok hemoglobínu, vzniká anémia, ktorá aktivuje proces erytropoézy. Preto majú tehotné ženy vysoké percento retikulocytov. Klinický obraz tohto javu zodpovedá norme pre fyziologickú adaptáciu tela na nosenie dieťaťa.

Retikulocyty sú nízke

Retikulocytopénia (keď je znížená hladina retikulocytov) často naznačuje poškodenie obličiek a/alebo kostnej drene. Faktory, ktoré znižujú obsah mladých červených krviniek, sú:

Anémia spôsobená nedostatkom kyseliny listovej, vitamínu B12 alebo železa, ktorá vedie k zániku červených krviniek.
Ochorenia obličiek, ale môžu mierne znížiť hladinu retikulocytov.
Zneužívanie alkoholu, pri ktorom sa prejaví pokles RTC v dôsledku potlačenia funkcie obličiek, supresie kostnej drene a priamej deštrukcie buniek v dôsledku intoxikácie.

Dôležité! Zhubné nádory môže tiež znížiť hladinu retikulocytov v krvi. To závisí od oblasti kostnej drene, do ktorej rakovina metastázovala.

Samotná hladina retikulocytov v krvi nie je diagnózou. Ak dôjde k významnej odchýlke od prípustného rozsahu, nastaví všeobecný smer diagnózy.

Stanovenie počtu retikulocytov– klinický krvný test, ktorý počíta mladé červené krvinky produkované kostnou dreňou. Štúdia dopĺňa všeobecný krvný test. Počítanie retikulocytov sa vykonáva s cieľom odlíšiť rôzne typy anémie, posúdiť fungovanie kostnej drene a sleziny, sledovať stavy pacientov s nedostatkom železa, vitamínu B12 alebo kyseliny listovej, zlyhaním obličiek, onkologické ochorenia. Krv sa odoberá na výskum z žily alebo kapilár. Počet retikulocytov sa stanoví pomocou metódy prietokovej cytometrie. Referenčné hodnoty pre mužov sú 23-70 tisíc / µl, pre ženy - 17-63,8 tisíc / µl. Časový rámec analýzy nepresiahne 1 pracovný deň.

Retikulocyty sú prekurzory červených krviniek. Produkuje ich kostná dreň, keď sa kmeňové bunky diferencujú a delia. Väčšina z retikulocyty sa nachádzajú v kostnej dreni, do krvného obehu sa dostávajú hlavne zrelé červené krvinky. Podiel retikulocytov v krvi je asi 0,5-2%. Pri vykonávaní analýzy sa určuje počet buniek tohto typu a ich percento z celkového počtu červených krviniek. Výsledky nám umožňujú vyhodnotiť tvorbu červených krviniek v kostnej dreni a určiť stupeň aktivity tohto procesu.

Telo si udržiava stabilnú hladinu červených krviniek v krvi. Keď sa ich množstvo zníži v dôsledku hemolýzy, narušenej syntézy, krvácania, aktivujú sa kompenzačné mechanizmy na obnovenie normálnych koncentrácií. Zmenou hladiny a percenta retikulocytov je možné určiť, či je zvýšená tvorba červených krviniek v kostnej dreni alebo či je tento proces inhibovaný. Ak kostná dreň funguje normálne, strata červených krviniek vedie k následnému zvýšeniu ich počtu a počtu retikulocytov. K poklesu hladiny týchto typov buniek dochádza pri poškodení červenej kostnej drene nádorom, metastázami, rádioterapiou a chemoterapiou. Na vykonanie analýzy na retikulocyty je biomateriálom kapilárna alebo venózna krv. Štúdia sa uskutočňuje pomocou hematologického analyzátora s použitím prietokovej cytometrie. Výsledky sa využívajú vo všeobecnej terapeutickej praxi, hematológii, pediatrii, infekčných chorobách a chirurgii.

Indikácie

Retikulocytový test sa používa na vyhodnotenie tvorby červených krviniek kostnou dreňou. Výsledky štúdie nám umožňujú rozlíšiť rôzne typy anémie. Na základe hladiny retikulocytov sa delia na hyporegeneračné a regeneračné. V prvom prípade sú hodnoty testu znížené, tvorba červených krviniek je nedostatočná a funkcia kostnej drene je znížená. Do tejto skupiny patrí hemolytická anémia pri chronických ochoreniach, celková intoxikácia, kachexia, nedostatok bielkovín, železa a vitamínov. Regeneračná anémia je sprevádzaná kompenzačným zvýšením hladiny retikulocytov na pozadí zvýšenej deštrukcie alebo straty červených krviniek. Do tejto skupiny patria posthemoragické a niektoré hemolytické anémie. Na určenie závažnosti anémie možno použiť test retikulocytov, potom sú jeho výsledky doplnené o indikátory hladiny červených krviniek, hemoglobínu a indexy červených krviniek.

Stanovenie hladiny retikulocytov je indikované pri zníženej hladine červených krviniek, hemoglobínu a ťažkostiach na častú únavu, bolesti hlavy, dýchavičnosť, krv v moči alebo stolici. Keď je diagnostikovaná anémia, je predpísaná analýza na posúdenie účinnosti liečby. Obzvlášť často sa používa na sledovanie anémie spôsobenej nedostatkom železa, vitamínu B12 alebo kyseliny listovej, ako aj vyvíjajúcej sa na pozadí zlyhania obličiek, chronické choroby. Na testovanie funkcie kostnej drene je retikulocytový test indikovaný pri zvýšená hladinačervených krviniek na určenie príčiny polycytémie.

Krvný test retikulocytov sa nepoužíva na stanovenie diagnózy. Jeho hlavným účelom je klinickej praxi– vypracovanie plánu ďalších diagnostických postupov a sledovanie úspešnosti terapie. Počet retikulocytov v krvi je relatívne stabilný, takže keď sa hladina červených krviniek a hematokritu zníži, ukazovatele analýzy sa umelo zvýšia. Tomu sa dá predísť výpočtom indexu retikulocytov - absolútneho počtu retikulocytov (percento retikulocytov vynásobené hematokritom). Ďalšou črtou tejto štúdie je, že výsledky naznačujú nedávnu aktivitu kostnej drene, keďže nezrelé červené krvinky cirkulujú v krvi 2 dni.

Príprava na analýzu a zber materiálu

Krv na analýzu retikulocytov sa odporúča darovať ráno nalačno. Minimálny interval medzi príjmom potravy a procedúrou je 3-4 hodiny. Intenzívne aktivity musíte ukončiť aspoň 24 hodín vopred. fyzická aktivita, pitie alkoholu, vyhýbať sa vystaveniu stresovým faktorom. Pri predpisovaní testu stojí za to povedať lekárovi o liekoch, ktoré užívate, pretože niektoré lieky ovplyvňujú hladinu retikulocytov v krvi. 30 minút pred odberom musíte prestať fajčiť a odstrániť fyzický a emocionálny stres.

Hladina retikulocytov sa zisťuje v kapilárnej resp žilovej krvi. V súlade s tým sa odber vzoriek uskutočňuje z prstenníka alebo z ulnárnej žily. Krv sa umiestni do skúmavky s antikoagulantom a odošle sa do laboratória. V súčasnosti sa takmer všade používajú hematologické analyzátory na počítanie retikulocytov. Štúdia prebieha pomocou prietokovej cytometrie – bunky v prúde tekutiny sa pohybujú cez veľmi úzku kapiláru a počítajú sa pri ožiarení laserom. Čas vykonania analýzy – 1 deň.

Normálne hodnoty

Výsledky testu retikulocytov zobrazujú absolútny počet buniek na jednotku objemu krvi a percento z celkového počtu červených krviniek. Normálne sa u pacientok pohybuje hladina retikulocytov od 17*109 do 63,8*109 buniek/l, u mužov od 23*109 do 70*109 buniek/l. Podiel buniek tohto typu na celkovom počte červených krviniek sa mení s vekom:

od narodenia do 2 týždňov – od 0,15 do 1,5 %;
od 2 týždňov do 1 mesiaca – od 0,45 do 1,4 %;
od 2 do 6 mesiacov – od 0,25 do 0,9 %;
od 6 mesiacov do 2 rokov – od 0,2 do 1 %;
od 2 do 6 rokov – od 0,2 do 0,7 %;
od 6 do 12 rokov – od 0,2 do 1,3 %;
od 12 do 18 rokov - od 0,12 do 2,05 % pre dievčatá, od 0,24 do 1,7 % pre chlapcov;
od 18 rokov - od 0,59 do 2,07 % u žien, od 0,67 do 1,92 % u mužov.

K fyziologickému zvýšeniu hladiny retikulocytov v krvi dochádza pri hladovaní kyslíkom spôsobenom výstupom do vysokej nadmorskej výšky alebo klesaním pod vodu, dlhodobým pobytom v nevetranej miestnosti, fajčením alebo pitím alkoholu. Okrem toho sa u tehotných žien niekedy zistí zvýšenie koncentrácie týchto buniek a považuje sa za normálny variant.

Zvýšiť úroveň

Príčinou zvýšenia hladiny retikulocytov v krvi môže byť krvácanie. Koncentrácia červených krviniek klesá, na jej obnovu kostná dreň zvyšuje produkciu ich prekurzorov. Pri akútnom krvácaní sa počet retikulocytov zvyšuje na 3. alebo 4. deň, pri chronickom krvácaní zostáva neustále zvýšený. Pri ochoreniach sprevádzaných hemolýzou (deštrukcia červených krviniek) je počet retikulocytov výrazne vyšší ako normálne, niekedy odchýlky dosahujú 300 %. Najčastejšími patológiami tejto skupiny sú dedičné defekty červených krviniek, ich autoimunitná deštrukcia, toxické poškodenie pre maláriu. Iné príčiny zvýšených hladín retikulocytov môžu zahŕňať polycytémiu, zápalové procesy, rakovina kostnej drene alebo rozšírenie metastáz do nej, obnovenie funkcií kostnej drene po ožarovaní a chemoterapii. Pri liečbe anémie naznačuje normalizácia koncentrácie retikulocytov úspech terapeutických opatrení.

Zníženie hladiny

Príčinou poklesu hladiny retikulocytov v krvi môže byť anémia spôsobená nedostatkom železa, vitamínu B12 alebo kyseliny listovej. V takýchto prípadoch je produkcia krviniek znížená v dôsledku nedostatku „stavebného materiálu“. Ďalším dôvodom poklesu hladiny retikulocytov je anémia, ktorá sa vyvíja na pozadí poškodenia kostnej drene alebo potlačenia jej funkcií. Zmeny tohto typu sa určujú kedy intoxikácia alkoholom, znížená činnosť štítnej žľazy, chronické infekcie, autoimunitné ochorenia, ochorenia obličiek, vystavenie toxickým látkam vrátane lieky, ožarovanie.

Liečba abnormalít

V klinickej praxi sa test retikulocytov najčastejšie predpisuje po všeobecnom krvnom teste, keď sa zníži hladina červených krviniek a hemoglobínu. Úroveň retikulocytov umožňuje vyhodnotiť funkciu kostnej drene, syntézu červených krviniek, určiť typ anémie a sledovať účinnosť jej liečby. Ak sa výsledky štúdie odchyľujú od normálu, mali by ste požiadať o radu svojho ošetrujúceho lekára – praktického lekára, pediatra, hematológa alebo chirurga. Aby sa zabránilo vplyvu fyziologických faktorov na počet retikulocytov, je potrebné vylúčiť situácie, ktoré spôsobujú hladovanie kyslíkom - výstupy do výšok alebo zostupy pod vodou, dlhodobý pobyt v znečistenej alebo dusnej miestnosti, fajčenie, pitie alkoholu.

Retikulocyty- mladé červené krvinky vznikajúce po strate jadier normoblastmi. Charakteristickým znakom retikulocytov je prítomnosť granulárno-vláknitej látky v cytoplazme, ktorá predstavuje agregované ribozómy a mitochondrie. Táto látka sa zisťuje pomocou špeciálnej metódy farbenia - supravitálnej (intravitálnej), t.j. bez predbežnej fixácie buniek. Granulovaná vláknitá látka v rôznych retikulocytoch je charakterizovaná polymorfizmom; Čím je bunka mladšia, tým je látka hojnejšia. V najmladších retikulocytoch má tvar hrubej gule, v zrelších bunkách sa objavuje vo forme sieťky, jednotlivých nití a potom jednotlivých zŕn. V náteroch zafarbených konvenčnými hematologickými metódami sú retikulocyty sivoružovej farby - polychromatofilné, to znamená zafarbené rôznymi farbivami.

Počet retikulocytov sa určuje mikroskopiou špeciálne zafarbených náterov

3.2.1 Spôsob farbenia krvných náterov na retikulocyty podľa Alekseeva (počítanie podľa Fonia)

Činidlo: pracovný roztok farby podľa Alekseeva

Vybavenie: mikroskop

počítať produkované nasledovne: siete retikulocytov sú zafarbené na modro. Pri počítaní červených krviniek sa počíta počet retikulocytov v zornom poli. Spočíta sa 1000 červených krviniek. Výsledok je vyjadrený v percentách.

Štandardná hodnota: Krv zdravého človeka obsahuje 0,2-1,0%

(alebo 2-10 dokonca povolených až do 12 ppm) retikulocytov

Klinická a diagnostická hodnota: Výskyt retikulocytov v periférnej krvi naznačuje zvýšenú funkciu kostnej drene a používa sa pri hodnotení rôznych typov anémie.

Zvýšený počet retikulocytov pozorované po strate krvi, s hemolytickou anémiou

Ťažká retikulocytóza- zaznamenáva sa pri hemolytickej žltačke

Zníženie počtu retikulocytov v prítomnosti anémie naznačuje aplastický typ hematopoézy.

Podľa hladiny retikulocytov v krvi sa anémia delí na:

- regeneračný(počet retikulocytov 0,5-5% je posthemoragická anémia);

- hyperregeneračný(počet retikulocytov viac ako 5% je hemolytická anémia);

- hypo- a aregeneratívne(počet retikulocytov je znížený alebo chýbajú, napriek ťažkej anémii - hypo- a aplastickej anémii s nedostatkom železa a B12).

Odporúčame tiež

Načítava...

Domov > Pre začiatočníkov

Počet retikulocytov. Počítanie retikulocytov v nátere po ich zafarbení špeciálnymi farbivami

Princíp metódy

Činidlá

Špeciálne vybavenie

Pokrok v odhodlaní

Farbenie retikulocytov na skle

Farbenie retikulocytov in vitro

Metóda 1 – farbenie retikulocytov v skúmavke brilantnou kresylovou modrou.

Metóda 2 - farbenie retikulocytov v skúmavke s Azur II.

Metóda 3 - farbenie retikulocytov v skúmavke s Azure I.

Počet retikulocytov.

Fotografie retikulocytov:

Literatúra:

Počet retikulocytov pomocou fluorescenčnej mikroskopie

Retikulocyty

Patologické inklúzie v červených krvinkách

Cytochemické štúdium lipidov

Analýza moču podľa Nechiporenka

Metódy farbenia retikulocytov

Technika odberu krvi na retikulocyty a technika počítania počtu retikulocytov.

Metódy na počítanie počtu retikulocytov

Retikulocyty

Retikulocyty (retikulocyty)

Morfológia a funkcie retikulocytov. Metódy počítania retikulocytov. Kvantitatívny obsah retikulocytov.

Morfológia a funkcie retikulocytov

Metódy počítania retikulocytov

1. Princíp metódy

2. Činidlá:

3. Farbenie

4. Počet retikulocytov

Kvantitatívny obsah retikulocytov

Supravitálna metóda farbenia retikulocytov.

Metóda na počítanie počtu retikulocytov po ich zafarbení brilantnou croesus silt modrou, azúrovou I alebo azúrovou II priamo na skle alebo v skúmavke

Retikulocyty

Technika odberu krvi na retikulocyty a technika počítania počtu retikulocytov.

Počítanie retikulocytov v nátere

Retikulocyty (retikulocyty)

Morfológia a funkcie retikulocytov. Metódy počítania retikulocytov. Kvantitatívny obsah retikulocytov.

Morfológia a funkcie retikulocytov

Metódy počítania retikulocytov

1. Princíp metódy

2. Činidlá:

3. Farbenie

4. Počet retikulocytov

Kvantitatívny obsah retikulocytov

Počítanie retikulocytov v nátere po ich zafarbení špeciálnymi farbivami

Princíp metódy

Činidlá

Špeciálne vybavenie

Pokrok v odhodlaní

Farbenie retikulocytov na skle

Farbenie retikulocytov in vitro

Metóda 1 – farbenie retikulocytov v skúmavke brilantnou kresylovou modrou.

Metóda 2 - farbenie retikulocytov v skúmavke s Azur II.

Metóda 3 - farbenie retikulocytov v skúmavke s Azure I.

Počet retikulocytov.

Fotografie retikulocytov:

Literatúra:

Počet retikulocytov pomocou fluorescenčnej mikroskopie

Retikulocyty

Patologické inklúzie v červených krvinkách

Cytochemické štúdium lipidov

Analýza moču podľa Nechiporenka

Metódy na počítanie počtu retikulocytov

Retikulocyty

Retikulocyty (klinický význam a laboratórna diagnostika)

Čo ukazujú retikulocyty v krvnom teste?

Čo sú a aké funkcie vykonávajú

Norm

Retikulocyty

Čo ukazujú retikulocyty a aké je ich označenie v krvnom teste?

Čo sú to retikulocyty a akú funkciu vykonávajú v tele?

Aká je norma pre deti a dospelých?

V akých prípadoch sú predpísané krvné testy?

Ako sa vykonáva diagnostický test?

Počítanie hladiny retikulocytov v krvi

Zvýšená hladina retikulocytov v krvi, čo to znamená?

Retikulocyty

Počítanie retikulocytov v nátere po ich zafarbení špeciálnymi farbivami